快速牛乳孕酮酶聯(lián)免疫測(cè)定基于自由孕酮和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記孕酮競(jìng)爭(zhēng)與吸附在微滴反應(yīng)板孔壁上的孕酮抗體結(jié)合，反應(yīng)時(shí)間為2小時(shí)，ABTS底物溶液反應(yīng)1小時(shí)，加反應(yīng)終止液后測(cè)410nm吸收值。當(dāng)特異性抗體量一定時(shí)，且小于被測(cè)和標(biāo)記抗原時(shí)，未標(biāo)記抗原濃度越高，標(biāo)記抗原和抗體的結(jié)合就越受到按捺，顯色愈淺。敏捷度為5.2pg/孔，批內(nèi)變異系數(shù)為9.06％，批間變異系數(shù)為12.9％。結(jié)合在免疫復(fù)合物上的酶，在碰到相應(yīng)酶底物時(shí)，經(jīng)催化水解及氧化還原等反應(yīng)，形成有色產(chǎn)物。elisa試劑盒
通過(guò)對(duì)乳汁中孕酮含量的測(cè)定，了解酶聯(lián)免疫吸附分析法的基本原理與檢測(cè)技術(shù)。顯色的深淺與酶量呈正相關(guān)，而與樣品中抗原含量呈負(fù)相關(guān)。與RIA法相似，利用被測(cè)抗原與酶標(biāo)記抗原對(duì)特異性抗體進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，測(cè)試(加入的)標(biāo)記在抗原上的酶催化底物所產(chǎn)生的顏色反應(yīng)。這些酶標(biāo)記（復(fù)合）物仍保持其免疫性和酶活性，再與相應(yīng)的抗體或抗原發(fā)生反應(yīng)，形成酶標(biāo)記的免疫復(fù)合物。酶聯(lián)免疫吸附分析法（ELISA試劑盒）是通過(guò)化學(xué)的方法將酶與抗原或抗體結(jié)合，形成酶標(biāo)記物（或通過(guò)免疫學(xué)方法將酶與抗酶抗體結(jié)合，形成免疫復(fù)合物）。elisa試劑盒
制作酶標(biāo)孕酮稀釋曲線(xiàn)及選擇酶標(biāo)孕酮工作濃度以初選的抗血清稀釋度包被酶標(biāo)板，將酶標(biāo)孕酮稀釋成不同濃度，繪出酶標(biāo)孕酮稀釋曲線(xiàn)，選擇斜率zui大并有一定光密度值的稀釋度為工作濃度。酶標(biāo)板的預(yù)處理新制的酶標(biāo)板含有有機(jī)成分，使用前先用無(wú)水乙醇浸泡二小時(shí)以上，再用蒸餾水沖刷干凈，37℃烘干或陰干。制作孕酮抗血清稀釋度曲線(xiàn)及選擇孕酮抗血清工作濃度將孕酮抗血清稀釋成不同濃度，包被統(tǒng)一酶標(biāo)板的不同孔眼后，測(cè)其光密度，其目的選擇zui適抗血清稀釋工作濃度。跟著抗血清濃度的下降，光密度也隨之下降，一般初選光密度值為1.0左右時(shí)的稀釋度為孕酮抗血清的工作濃度。制作酶標(biāo)孕酮稀釋曲線(xiàn)及選擇酶標(biāo)孕酮工作濃度以初選的抗血清稀釋度包被酶標(biāo)板，將酶標(biāo)孕酮稀釋成不同濃度，繪出酶標(biāo)孕酮稀釋曲線(xiàn)，選擇斜率zui大并有一定光密度值的稀釋度為工作濃度。
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