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解析細胞MTT的用途及原理

閱讀:267發(fā)布時間:2015-5-28

懸浮細胞:

1、ELISA試劑盒收集對數(shù)期細胞,調(diào)節(jié)細胞懸液濃度1×106/ml,按次序?qū)ⅱ傺a足的1640(無血清)培養(yǎng)基40ul ;②加Actinomycin D(有毒性)10ul用培養(yǎng)液稀釋 (儲存液100mg/ml,需預(yù)試尋找*稀釋度,1:10-1:20);③需檢測物10ul;④細胞懸液50ul(即5×104cell/孔),共 100ul加入到96孔板(邊緣孔用無菌水填充)。每板設(shè)對照(加100ml 1640)。

2、置37℃,5%CO2孵育16-48小時,倒置顯微鏡下觀察。

3、ELISA試劑盒每孔加入10 ul MTT溶液(5 mg/ml,即0.5%MTT),繼續(xù)培養(yǎng)4 h。(懸浮細胞推薦使用WST-1,培養(yǎng)4 h后可跳過步驟4),直接酶聯(lián)免疫檢測儀OD570nm(630nm校準)測量各孔的吸光值)

4、離心(1000轉(zhuǎn)x10min),小心吸掉上清,每孔加入100 ul二甲基亞砜,置搖床上低速振蕩10 min,使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀OD570nm(630nm校準)測量各孔的吸光值。

5、ELISA試劑盒同時設(shè)置調(diào)零孔(培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜),對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜),每組設(shè)定3復(fù)孔。ASB10    英文名稱:    含錨蛋白重復(fù)序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族10抗體     0.1ml
ALDH1L1    英文名稱:    乙醛脫氫酶1蛋白家族L1抗體     0.1ml
Axin 2    英文名稱:    軸抑制蛋白2抗體     0.2ml
ANGPTL6    英文名稱:    血管生成素相關(guān)蛋白6抗體     0.2ml
AMH    英文名稱:    Muellerian繆勒管激素抑制因子抗體     0.2ml
EphA8    英文名稱:    *蛋白激酶受體A8抗體     0.2ml
Acetoacetyl-CoA synthetase    英文名稱:    脂肪酰*家族成員1抗體     0.2ml
ARNTL2    英文名稱:    芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白樣2抗體     0.2ml
phospho-AANAT (Thr29)    英文名稱:    磷酸化芳香胺N-乙?;D(zhuǎn)移酶抗體     0.1ml
ABLIM1    英文名稱:    肌動蛋白結(jié)合蛋白1抗體     0.2ml
AMIGO2    英文名稱:    粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體     0.2ml
Advillin    英文名稱:    肌動蛋白結(jié)合蛋白DOC6抗體     0.2ml
AFG3L2    英文名稱:    AFG3樣蛋白2/脊髓小腦共濟失調(diào)蛋白28抗體     0.2ml
AIP1    英文名稱:    激活素受體相互作用蛋白1抗體     0.2ml


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