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技術(shù)文章

夾心法ELISA常見技術(shù)指南

閱讀:354發(fā)布時間:2015-5-13

DIY夾心法ELISA試劑盒常見技術(shù)指南:
1、選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進行配對;若選擇兩個單抗,必須識別不同表位的抗體;從同一家公司選擇抗體對。
2、ELISA試劑盒實驗中為了確定*信號和zui低背景應將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預實驗中進行彼此相抗的滴定。同時,應包括在適當范圍內(nèi)的標準品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進行操作。
3、標準品的配制:對于每種細胞因子應仔細閱讀說明書,注意每批的細節(jié)。在使用細胞因子前,瞬時離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細胞因子。根據(jù)每批說明書中的細節(jié),將凍干的細胞因子復溶。
4、一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml。可利用標準的ELISA試劑盒操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。
5、為了優(yōu)化靈敏度,建議過夜孵育標準品和標本。
6、若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng),應嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。
7、當測定混合液體中的抗原時,如血清,建議在標本稀釋液中加不相干的Ig.Galectin 1    半乳糖凝集素1抗體
IQCF1    IQCF1蛋白抗體
IQCJ    IQCJ蛋白抗體
IGSF1    抑制素結(jié)合蛋白抗體
IGSF3    免疫球蛋白超家族成員3抗體
IGSF6    免疫球蛋白超家族成員6抗體
IGSF9    免疫球蛋白超家族成員9抗體
IGSF10    免疫球蛋白超家族成員10抗體
IGSF11    大腦和睪丸特異性免疫球蛋白超家族成員11抗體
IFNAR1    干擾素α受體抗體
phospho-IFNAR1(Ser535+Ser539)    磷酸化干擾素α受體抗體
Phospho-Insulin Receptor Beta (Tyr1185)    磷酸化胰島素受體β抗體
IKBKE    核因子κB抑制蛋白E抗體
phospho-ITGB4(Tyr1494)    磷酸化整合素β4抗體
phospho-ITGB4(Tyr1526)    磷酸化整合素β4抗體
IQCD    IQCD蛋白抗體
IQCC    IQCC蛋白抗體


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