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新型血小板相關內(nèi)皮分泌蛋白SCUBE1抗體的生wu素化標記實驗要點:

1. 費用 如在反應混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會抑制標記反應。因此,蛋白質(zhì)在反應前要對 0.1mol/L碳酸qing鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析;

2.所用的NHSB及待生wu素化蛋白質(zhì)之間的分子比按蛋白質(zhì)表面的ε-氨基的密度會有所不同,選擇不當則影響標記的效率,應先用幾個不同的分子比來篩選最適條件;

3.用NHSB量過量也是不利的,抗原的結(jié)合位點可能因此被封閉,導致抗體失活;

4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生wu素化不足,此時可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等;

5.當游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結(jié)合位點時,或位于酶的催化位點時,生wu素化會降低或損傷抗體蛋白的結(jié)合力或活性;

6.生wu素還可能與不同的功能基團,如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及ben酚基,也可與糖基共價結(jié)合;

7.交聯(lián)反應后,應充分透析,否則,殘余的生wu素會對生wu素化抗體與親和素的結(jié)合產(chǎn)生競爭作用;

8.在細胞的熒光標記實驗中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對某些細胞可導致高本底。

小鼠P物質(zhì)(mouse Substance P)

小鼠催乳素(mouse PRL)

小鼠孕酮(mouse PROG)

小鼠睪酮(mouse TESTO)

小鼠胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(mouse TARC)

小鼠組織因子(mouse TF)

小鼠組織因子抑制物(mouse TFPI)

小鼠轉(zhuǎn)化生長因子-β1(mouse TGF-β1)

小鼠轉(zhuǎn)化生長因子-β2(mouse TGF-β2)

小鼠可溶性粒細胞靶受體(mouse sTREM-1)

小鼠端粒酶(mouse Telomerase)

小鼠Toll樣受體-2(mouse TLR-2)

小鼠Toll樣受體-4(mouse TLR-4)

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1(mouse TIMP-1)

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-2(mouse TIMP-2)

小鼠腫瘤壞死因子-a(mouse TNF-a)

小鼠腫瘤壞死因子-b(mouse TNF-b)

小鼠腫瘤壞死因子-r(mouse TNF-r)

小鼠組織纖溶酶原激活劑(mouse t-PA)

小鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白(mouse Transferrin)