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人17-羥皮質(zhì)類固醇(17-OHCS)Elisa試劑盒操作步驟：

1、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。

2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔和空白對(duì)照孔，記錄各孔位置，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍)；空白對(duì)照孔不加。

4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板)。

6、加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液50μL，空白對(duì)照孔不加。

7、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

8、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板)。

9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s)，37℃避光顯色15min。

10、終止：取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)(顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11、測定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。

12、計(jì)算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。最終濃度為實(shí)際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。

巨噬細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）

腫瘤壞死因子-a（TNF-a）

可溶性細(xì)胞間黏附因子-1（sICAM-1）

可溶性血管間粘附因子-1（VCAM-1）

白介素-6（IL-6）

白介素-8（IL-8）

高敏C-反應(yīng)蛋白（hs-CRP）

內(nèi)皮素（ET）

一氧化氮（NO）

血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）

血管緊張素I (腎素、AngI)

醛固酮（ALD）

基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）

基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1（TIMP-1）

 氧化低密度脂蛋白(ox_LDL)

可溶性細(xì)胞表面分化抗原40配體（sCD40L）

脂聯(lián)素(adiponectin)

組織型纖溶酶原激活劑（t-PA）

纖溶酶原激活物抑制因子-1（PAI-1）

E-選擇素（E-Selectin）

P-選擇素 CDp62 血小板活化

同型半胱氨酸

血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）