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技術(shù)文章

豬源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒操作步驟說明

閱讀:719          發(fā)布時(shí)間:2020-4-14

豬源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒操作步驟:

1:樣品準(zhǔn)備:取1毫升細(xì)胞培養(yǎng)上清(貼壁和懸浮細(xì)胞都可以,*已培養(yǎng)48小時(shí)以上),在16000g離心5分鐘,小心棄去上清,避免丟失沉淀(沉淀量有可能很少,目視看不到)。將沉淀用無菌PBS重懸,在16000g離心5分鐘,同樣小心棄去上清,如此反復(fù)用無菌PBS洗三次。zui后將獲得的沉淀用100微升超純水重懸,置于100℃水浴中孵育5分鐘。如此制備好的樣品可在4℃保存1到2個(gè)月。

2:PCR反應(yīng)的準(zhǔn)備:

待各組份融化后先瞬時(shí)離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應(yīng)體系,每次實(shí)驗(yàn)需加一個(gè)陰性和一個(gè)陽性對照,測試反應(yīng)管可以有多個(gè)。配制過程中應(yīng)注意無菌,戴口罩,并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風(fēng)壓的設(shè)備如超凈臺或生物安全柜中進(jìn)行操作。建議配制完畢后瞬時(shí)離心以使液體沉至管底。

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