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大鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)優(yōu)化的過(guò)程
閱讀:822 發(fā)布時(shí)間:2018-9-6大鼠ELISA試劑盒包被條件的優(yōu)化:
1、包被液的選擇:一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液,假如包被的抗原在堿性條件下不穩(wěn)定的話,也能夠運(yùn)用pH7.2的磷酸鹽緩沖液。
2、包被濃度的選擇:包被的zui適濃度隨固相載體和包被物的性質(zhì)改動(dòng),一般蛋白質(zhì)的包被濃度為1-5ug/ml,要明晰關(guān)于特定包被抗原的zui適包被濃度需求經(jīng)過(guò)試驗(yàn)來(lái)斷定。
3、包被溫度的選擇:一般是4-8度條件下放置一個(gè)黑夜或許37度保溫2小時(shí),咱們激烈建議4-8度條件下包被,有利于蛋白活性的堅(jiān)持。
4、包被抗原的選擇:可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類(lèi)。小分子抗原比方多肽以及一些小分子有機(jī)化合物,由于分子量太小,一般難于直接吸附在酶標(biāo)板上,一般都先使其與無(wú)關(guān)蛋白質(zhì),比方BSA等偶聯(lián),偶聯(lián)物吸附于固相載體上。
ELISA試劑盒加樣的優(yōu)化:在這一進(jìn)程中,一般情況下有三次加樣,它們分別是加標(biāo)本,加酶物,加底物。凍住血清融解后,蛋白質(zhì)部分濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,防止氣泡,可上下倒置混和,不要在混勻器上激烈振蕩。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,而血清標(biāo)本只需待血清天然凝結(jié)、縮短后即可取得。也可在板孔中參與稀釋液,再在其參與血清標(biāo)本,然后在微型轟動(dòng)器上轟動(dòng)1分鐘以確?;旌?。一般說(shuō)來(lái),在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃,超越一星期測(cè)定的需低溫冰存。