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ELISA試劑盒?問題分析
1. 基因工程抗原與合成肽抗原的區(qū)別
1.1 基因工程抗原是抗原基因在質(zhì)粒載體中原核或真核表達(dá)的蛋白質(zhì)抗原，多以大腸桿菌或酵母菌為表達(dá)系統(tǒng)。該類抗原與合成肽相比具有以下特點(diǎn)：
a.分子量大。合成肽采用化學(xué)方法制備，由于工藝的局限，合成數(shù)量有限，只能達(dá)到數(shù)百個(gè)氨基酸；而利用基因工程制備的抗原，分子量更大。
b.穩(wěn)定性好。包被的抗原的穩(wěn)定性可使試劑盒的效期得到保證，早期以合成肽為包被抗原的試劑盒效期只有3-4 個(gè)月，采用基因工程抗原后效期大大延長了。
c.基因工程抗原將特異性抗原決定簇基因融合表達(dá)，ELISA試劑盒表達(dá)產(chǎn)物包含更多的抗原決定簇，可提高試劑盒的靈敏度，提高檢出率。
d.純化難度大?；蚬こ炭乖募兓夹g(shù)難度較大。
1.2 合成多肽抗原是根據(jù)蛋白質(zhì)抗原分子的某一抗原決定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。合成肽抗原有以下特點(diǎn)：
a.分子量太小
b.一般只含有一個(gè)抗原決定簇
c.純度高
d.穩(wěn)定性差
由于基因工程抗原較于合成肽抗原有*的*性，ELISA試劑盒診斷試劑經(jīng)歷了從合成肽向基因工程抗原的過渡。就HCV ELISA 試劑盒來講，*代產(chǎn)品為合成肽抗原，主要是HCV 特異性抗原決定簇的肽片段；第二代產(chǎn)品包被的抗原既有基因工程抗原又有合成肽，只是當(dāng)時(shí)的基因工程抗原不全，僅包括了HCV 的核心區(qū)片段；第三代產(chǎn)品基本上采用了基因工程抗原，而且這些抗原包括更多、更穩(wěn)定、純度更高的HCV 特異性抗原。第三代試劑的敏感度大大提高了。
由于歷史的原因，人們往往以反應(yīng)本底的好壞來衡量ELISA 反應(yīng)試劑盒，因此有些為了保持較好的本底采用了單片段基因工程抗原及合成肽包被，該類試劑盒的流行病學(xué)敏感度不夠，穩(wěn)定性也成問題。值得欣慰的是也有ELISA試劑盒堅(jiān)持試劑盒高的流行病學(xué)敏感度，科學(xué)得對待反應(yīng)結(jié)果。
2．假陽性本底產(chǎn)生的原因
2. 1 抗原因素
2.1. 1 融合蛋白對基因工程抗原特異性的影響。以丙肝診斷試劑盒為例為例，因?yàn)榘坏幕蚬こ炭乖瓰槿诤系鞍祝?/span>ELISA試劑盒包含了來自表達(dá)載體的一些序列，因此可以與血清中抗大腸桿菌的因子發(fā)生反應(yīng)而產(chǎn)生了可疑標(biāo)本。