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組織處理

恰當(dāng)?shù)慕M織處理是做好免疫組化染色的先決條件，也是決定染色成敗的內(nèi)部因素，在組織細(xì)胞材料準(zhǔn)備的過(guò)程中，不僅要求保持組織細(xì)胞形態(tài)完整，更要保持組織細(xì)胞的抗原性不受損或彌漫，防止組織自溶。如果出現(xiàn)自溶壞死的組織，抗原已經(jīng)丟失，即使用很靈敏的檢測(cè)抗體和高超的技術(shù)，也很難檢出所需的抗原，反而往往由于組織的壞死或制片時(shí)的刀痕擠壓，在上述區(qū)域易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。

1、組織及時(shí)取材和固定  組織標(biāo)本及時(shí)的取材和固定是做好免疫組化染色的關(guān)鍵*步，是有效防止組織自溶壞死，抗原丟失的開(kāi)始，離體組織應(yīng)盡快的進(jìn)行取材，2 h內(nèi)，取材時(shí)所用的刀應(yīng)銳利，要一刀下去切開(kāi)組織，不可反復(fù)切拉組織，造成組織的擠壓，組織塊大小要適中，一般在2.5 cm×2.5 cm×0.2 cm，切記取材時(shí)組織塊寧可面積大，千萬(wàn)不能厚的原則，(也就是說(shuō)組織塊的面積可以大到3 cm×5 cm，但組織塊的厚度千萬(wàn)不能超過(guò)0.2 cm，否則將不利于組織的均勻固定)。固定液快速滲透到組織內(nèi)部使組織蛋白能在一定時(shí)間內(nèi)迅速凝固。從而完好的保存抗原和組織細(xì)胞形態(tài)。

對(duì)于固定液的選擇，原則上講，應(yīng)根據(jù)抗原的耐受性來(lái)選擇相應(yīng)的固定液，但除非是專項(xiàng)科研項(xiàng)目，在病理常規(guī)工作很難做到這一點(diǎn)，因?yàn)椴±淼脑\斷和鑒別診斷都是在常規(guī)HE病理診斷的基礎(chǔ)上決定是否進(jìn)行免疫組化的染色，而HE染色的常規(guī)組織處理是采用10%的中性緩沖福爾馬林或4%緩沖多聚甲醛4倍于組織體積進(jìn)行組織固定，利用其滲透性強(qiáng)，對(duì)組織的作用均勻進(jìn)行固定，但組織固定時(shí)間在l2 h內(nèi)，一般固定時(shí)間不應(yīng)超過(guò)24 h。隨著固定時(shí)間的延長(zhǎng)對(duì)組織抗原的檢出強(qiáng)度將逐漸降低。

2、組織脫水、透明、浸蠟  組織經(jīng)固定后進(jìn)行脫水、透明、浸蠟和包埋。掌握的原則是脫水透明要充分但不能過(guò)，浸蠟時(shí)間要夠，溫度不能高，否則造成組織的硬脆使組織切片困難，即使能切片，由于組織的硬脆，也使切片不能完好平整，染色過(guò)程中極易脫片，對(duì)免疫組化染色抗原的定位及背景都不利，所以*脫水和二甲苯透明的時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，正常大小的組織*脫水l h×3次，二甲苯透明l h×2次即可，浸蠟及包埋石蠟溫度不要超過(guò)65 ℃。細(xì)胞