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技術(shù)文章

幾大類組織的取材技術(shù)

閱讀:1276          發(fā)布時(shí)間:2015-5-14


(一)血液細(xì)胞的取材
 
血液及淋巴組織中的血細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的取材,一般多抽取靜脈外周血,ELISA試劑盒或從淋巴組織中(如脾、扁桃體、胸腺、淋巴結(jié)等)分離細(xì)胞,取材時(shí)應(yīng)注意抗凝,通常采用肝素抗凝,常用肝素濃度為8~10u/mL血,抽血的針筒也要用肝素濕潤(rùn),若從血站取來(lái)的獻(xiàn)血員的血液,因血站不用肝素抗凝劑,常用含枸椽酸鹽抗凝,對(duì)此類血標(biāo)本千萬(wàn)不能用含鈣、鎂離子的洗液來(lái)處理細(xì)胞,因此時(shí)的鈣、鎂離子可加速血液中凝血酶促進(jìn)血液凝固而影響收獲血細(xì)胞及淋巴細(xì)胞。此外要嚴(yán)格無(wú)菌,盡量新鮮使用。
 
(二)骨髓、羊水、胸/腹水細(xì)胞取材
 
取上述標(biāo)本時(shí),除嚴(yán)格無(wú)菌,注意抗凝外,ELISA試劑盒還要盡快分離培養(yǎng),一般無(wú)需其他處理,離心后,用無(wú)鈣、鎂PBS洗兩次,再用培養(yǎng)液洗一次后即可培養(yǎng),不宜低溫存放。具體操作詳見后面有關(guān)章節(jié)。
 
(三)動(dòng)物組織取材
 
1、鼠胚組織取材
 
首先用引頸或氣管窒息致死法處死孕期合適的動(dòng)物,然后將其整個(gè)浸泡在含有75%酒精的燒杯中,5分鐘后(注意時(shí)間不能太長(zhǎng),以避免酒精從口或其他通道進(jìn)入體內(nèi),影響組織活力),取出動(dòng)物,在消毒過(guò)的木板上可用無(wú)菌的圖釘或大頭針固定四肢,切開皮膚,用無(wú)菌操作法解剖取胚或用無(wú)菌止血鉗挾起皮膚、用無(wú)菌眼科剪沿軀干中部環(huán)形剪開皮膚,用止血鉗分別挾住兩側(cè)皮膚拉向頭尾,把動(dòng)物反包,暴露軀干,然后再固定,更換無(wú)菌解剖器材,采用無(wú)菌操作法解剖取出胚胎。
 
2、幼鼠胚腎(或肺)取材
 ELISA試劑盒
幼鼠采用上述方法處死消毒后,腹部朝上固定在木板上,先切開游離毛皮并拉開至兩側(cè):然后采用無(wú)菌法打開胸腔取肺,或背部朝上固定在木板上,先將背部毛皮切開游離并拉向兩側(cè),然后采用無(wú)菌法從背部打開腹腔取腎。

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