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上海撫生實業(yè)有限公司
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閱讀:256發(fā)布時間:2015-8-3
(一)組織化學(xué)(histochemistry):一般稱為特殊染色,基本原理是通過應(yīng)用某些能與組織細胞化學(xué)成分特異性結(jié)合的顯色試劑,定位地顯示組織細胞的特殊化學(xué)成分并保持原有的形態(tài)學(xué)改變,對一些代謝性疾病的診斷具有一定的參考價值。通過光鏡或電鏡觀察,可以檢測組織切片內(nèi)的蛋白質(zhì)、糖類、脂類、酶類、核酸與某些金屬元素等。
1.過碘酸雪夫氏染色(periodic acid-schiff stain,PAS染色):過碘酸是一種氧化劑,它能氧化糖類及有關(guān)物質(zhì)中的1.2乙二醇基使之變?yōu)槎┡cSchiff氏試劑結(jié)合,形成紅色的取代色素而得到定位。PAS染色可顯示糖原、中性黏液物質(zhì)、基底膜、軟骨、垂體、霉菌
及寄生蟲等物質(zhì)。是廣泛應(yīng)用的染色方法。在腎小球腎炎時PAS染色可顯示基底膜和系膜區(qū)的改變。
染色方法:
(1)切片按常規(guī)脫蠟水洗,再用蒸餾水洗滌。
(2)0.5%~1%過碘酸水溶液氧化5~10min。
(3)蒸餾水充分洗滌,至少3次。
(4)Schiff氏試劑染10~30min。
(5)傾去染液后,直接用亞硫酸沖洗液處理切片3次,每次2 min,以達到分化。
(6)自來水沖洗5~10 min,使之顯現(xiàn)出紅色。然后蒸餾水洗1次。
(7)明礬蘇木精染核,自來水充分洗滌。
(8)95%乙醇及無水乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固。
結(jié)果判定:PAS陽性物質(zhì)呈鮮紫紅色,其它組織淡粉紅色,細胞核呈淺藍色。
2.結(jié)締組織的染色方法
一般所說的結(jié)締組織是指纖維性結(jié)締組織而言,其結(jié)構(gòu)特點是細胞間質(zhì)內(nèi)基質(zhì)外含有較多的纖維成分,主要是膠原纖維、彈性纖維和網(wǎng)狀纖維,我們僅簡述這三種纖維的常見染色方法。
(1)Mallory三色染色法:常用于判定多種組織、器官的病變程度及修復(fù)情況,區(qū)分腫瘤組織中的纖維成分與平滑肌。
染色步驟:
①中性甲醛液固定組織,石蠟切片,常規(guī)脫蠟至水。
②重鉻酸鉀液10min。
③蒸餾水沖洗2min,蒸餾水2次。
④酸性復(fù)紅液2min,蒸餾水稍洗。
⑤苯胺藍液20min,95%乙醇快速分化。
⑥直接用無水乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封固。
結(jié)果判定:膠原和網(wǎng)狀纖維呈藍色。
(2)Van Gieson苦味酸酸性復(fù)紅法:可以顯示組織、器官的損傷、修復(fù)及硬化情況,特別是用于鑒別腫瘤組織中的膠原纖維與平滑肌纖維,可為診斷提供重要依據(jù)。
染色步驟:
①組織切片按常規(guī)脫蠟水洗。
②用Weigert蘇木素液染細胞核5~l0 min。
③自來水充分洗滌數(shù)分鐘。
④用顯微鏡檢查細胞核的著色程度,過深可用0.5%鹽酸乙醇分化。
⑤自來水洗至變藍;用蒸餾水洗。
⑥用Van Gieson液染1~5 min。
⑦傾去染液,直接用95%乙醇分化和脫水。
⑧無水乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封固。
結(jié)果判定: 膠原纖維呈深粉紅色,肌纖維、胞漿及紅細胞黃色,細胞核呈棕黑色或蘭黑色。
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