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技術(shù)文章

細(xì)胞轉(zhuǎn)化操作流程

閱讀：380發(fā)布時間：2015-7-8

1、ELISA試劑盒在冰上預(yù)冷2支14-ml BD Falcon聚丙烯圓底離心管。1支用來轉(zhuǎn)化樣品，1支做pUC18對照。同時將NZY+ broth培養(yǎng)基在42°C預(yù)熱。

2、 冰上融化感受態(tài)細(xì)胞。融化時輕輕將細(xì)胞混勻并分裝成100ul/管。

3、 每管中加入隨試劑盒提供的4 ml b-ME（巰基乙醇）。

4、 溫和轉(zhuǎn)動試管，將細(xì)胞在冰上放置10分鐘，每2分鐘溫和轉(zhuǎn)動一下。

5、 ELISA試劑盒每管細(xì)胞加入0.1–50 ng樣品DNA （或2 ml連接反應(yīng)物）（參見DNA 質(zhì)量與體積說明。）用滅菌dH2O水按1:10稀釋對照pUC18 DNA，并取1 ml稀釋的pUC18 DNA加入轉(zhuǎn)化細(xì)胞。

6、 溫和轉(zhuǎn)動試管，并在冰上放置30分鐘。

7、 試管在42°C水浴熱激30秒。熱激時間對轉(zhuǎn)化效率極度重要。

8、 試管冰浴2 分鐘。

9、 每管加入0.9 ml 預(yù)熱 （42°C） 的NZY+ 肉湯，37°C、225–250 rpm 搖床培養(yǎng)1 小時。

10、ELISA試劑盒取 200 ml轉(zhuǎn)化混和物鋪帶有相應(yīng)篩選抗生素的LB瓊脂糖平板（如果進(jìn)行顏色篩選還需加入IPTG和X-gal）。pUC18陽性對照則取5 ml 鋪氨芐*LB瓊脂糖平板。


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