一、 抗體的酶標(biāo)記及質(zhì)量鑒定
ELISA試劑盒本試驗(yàn)采用改良過(guò)碘酸鈉法將辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記在抗體上[1]，標(biāo)記完后取上清用Sephedex G200 凝膠層析進(jìn)行純化，洗脫液為0.2mol/L pH7.4的PBS，流速為15ml/h，分步收集，每支3ml，以紫外分光光度計(jì)測(cè)A280吸光度值，以洗脫體積為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)做圖，收集*峰即為酶標(biāo)抗體峰。標(biāo)記完后用紫外分光光度計(jì)在分別在280nm、及403nm處測(cè)定酶標(biāo)記物的A值，計(jì)算免疫球蛋白量、摩爾比值、酶結(jié)合率以及標(biāo)記率。
二、包被用緩沖液及zui適包被抗原濃度的優(yōu)化
1、包被緩沖液的優(yōu)化
ELISA試劑盒包被抗原時(shí)，為了得到*的包被效果，我們采用了碳酸鹽緩沖液（50mM ph9.6 ）、磷酸鹽緩沖液（50mM ph7.6）、以及TRIS鹽酸緩沖液（50 mM ph7.6）三種緩沖液作為包被液，抗原包被濃度為5ug/ml，及2.5ug/ml,酶標(biāo)抗體工作濃度為1：400及1：300，用自動(dòng)酶標(biāo)儀分析，選擇*的包被緩沖液系統(tǒng)。同時(shí)為了保證緩沖液能夠長(zhǎng)期保存，我們?cè)诎灰褐刑砑恿?.01%的硫柳汞作為防腐劑。
2、zui適抗原包被濃度的優(yōu)化
ELISA試劑盒用優(yōu)化好的包被緩沖液，將包被抗原（ALB）稀釋成0.1ug/ml，1.0ug/ml，2.0ug/ml，4.0 ug/ml，6.0 ug/ml，8.0 ug/ml，10.0 ug/ml等六個(gè)濃度，包被微孔板，每孔100ul；競(jìng)爭(zhēng)抗原濃度為4.0 ug/ml，2.0 ug/ml；酶標(biāo)抗體稀釋度為1：300，經(jīng)孵育、顯色、終止后用自動(dòng)酶標(biāo)儀分析。顯色的強(qiáng)度在一定范圍內(nèi)與包被的抗原量成正比，但隨著包被抗原濃度的增加，顯色的強(qiáng)度反而降低，我們選擇臨界包被值作為包被抗原量。
ADRB1 腎上腺素能受體β1抗體
ADRB2 腎上腺素能受體β2/β2-AR抗體
AGEs 晚期糖基化終末產(chǎn)物抗體
Aggrecan1 軟骨蛋白聚糖抗體
ALAS-E 5-氨基乙酰丙酸合酶1抗體
ASPP1 p53凋亡刺激蛋白1抗體
ASPP2 P53凋亡刺激蛋白2抗體
ARIP2B 激活素受體2B抗體
AIMP2 AIMP2抗體
ACHE 乙酰*酶抗體
ALAS1 5-氨基乙酰丙酸合酶1抗體
alpha Defensin 1 防御素α1/3抗體
ABCG4 ABC膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體
ATEXPA10 植物延長(zhǎng)蛋白（擬南芥）
A Raf A-Raf抗體
Phospho-A Raf(Ser299) 磷酸化A-Raf抗體
AMPD3 紅細(xì)胞腺苷脫氨酶3抗體
ABP 雄激素結(jié)合蛋白抗體
ALR 肝再生增強(qiáng)因子抗體
Amyloid Precursor Protein APP/ABPP淀粉樣肽前體蛋白抗體
AFP(A2) 甲胎蛋白單克隆抗體（包被）
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