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DIY夾心法ELISA試劑盒常見技術(shù)指南

閱讀:189發(fā)布時(shí)間:2015-5-13

DIY夾心法ELISA試劑盒常見技術(shù)指南:
1、選擇抗體時(shí)選擇一個(gè)單抗和一個(gè)多抗進(jìn)行配對;若選擇兩個(gè)單抗,必須識別不同表位的抗體;從同一家公司選擇抗體對。
2、ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中為了確定*信號和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時(shí),應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作。
3、標(biāo)準(zhǔn)品的配制:對于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書,注意每批的細(xì)節(jié)。ELISA試劑盒在使用細(xì)胞因子前,瞬時(shí)離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié),將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。
4、一般待測抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml??衫脴?biāo)準(zhǔn)的ELISA試劑盒操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。
5、為了優(yōu)化靈敏度,建議過夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。
6、若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng),應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。
7、當(dāng)測定混合液體中的抗原時(shí),如血清,建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig.Galectin 1    半乳糖凝集素1抗體
phospho-IKK gamma (Ser31)    磷酸化KB抑制蛋白激酶γ抗體
Phospho-IKK alpha (Thr23)    磷酸化KB抑制蛋白激酶α/IKK α 抗體
phospho-IKK beta(Tyr199)    磷酸化KB抑制蛋白激酶β抗體
phospho-IKK beta(Tyr188)    磷酸化KB抑制蛋白激酶β抗體
phospho-IKK alpha (Tyr463)    磷酸化KB抑制蛋白激酶α抗體
phospho-IKK gamma (Ser376)    磷酸化KB抑制蛋白激酶γ抗體
phospho-IKK beta(Ser466)    磷酸化KB抑制蛋白激酶β抗體
IFI6    干擾素alpha誘導(dǎo)蛋白6抗體
IL-17E/IL-25    白介素-17E抗體
phospho-IRS-1(Ser307)    磷酸化胰島素受體底物p-IRS-1/2抗體
IARS2    tRNA異*連接酶抗體
Integrin alpha 2/CD49b    整合素α2抗體
IFIT3    干擾素誘導(dǎo)的三角形四肽重復(fù)蛋白3抗體
IFIT5    干擾素誘導(dǎo)的三角形四肽重復(fù)蛋白5抗體
IFITM2    干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白2抗體


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