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豬肺炎支原體抗體的原理

閱讀:387發(fā)布時間:2015-4-3

實驗原理
ELISA試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中豬肺炎支原體抗體(MP-Ab)水平。用純化的豬肺炎支原體抗體(MP-Ab)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加肺炎支原體抗體(MP-Ab),再與 HRP 標記的肺炎支原體抗體(MP-Ab)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的肺炎支原體抗體(MP-Ab)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中豬肺炎支原體抗體(MP-Ab)濃度。
豬肺炎支原體抗體ELISA試劑盒注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5 分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,*使用排槍加樣。
4. ELISA試劑盒請每次測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值大于標準品孔*孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.ELISA試劑盒本試劑不同批號組分不得混用。

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