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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
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閱讀:3146發(fā)布時(shí)間:2015-1-14
在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中常需動(dòng)物的全身抗凝,采出的全血或血漿有的也需加入適當(dāng)?shù)目鼓齽┛鼓?。?duì)抗凝劑的要求是:用量少、溶解度大、不帶進(jìn)干擾實(shí)驗(yàn)的雜質(zhì)。
(1)肝素抗凝作用原理
肝素的抗凝作用很強(qiáng),作死亡復(fù)蘇等實(shí)驗(yàn)時(shí),常用它作動(dòng)物全身抗凝劑,肝素的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力,阻止血小板凝聚以及抑制抗*等作用,從而使血液不發(fā)生凝固。
注意事項(xiàng):做全血DNA提取的時(shí)候抗凝劑不能采用肝素!因?yàn)楦嗡厥蔷酆厦告準(zhǔn)椒磻?yīng)的抑制劑!
(2)配制和用量
純的肝素10mg能抗凝65~125 ml血液(按lmg等于125U,10~20U能抗1 ml血液計(jì))。但由于肝素制劑的純度高低以及其保存時(shí)間長(zhǎng)短不等,因而其抗凝效果也不相同。一般可配成1%肝素生理鹽溶液,用時(shí)取0.1毫升于試管內(nèi),100℃烘干,每管能抗凝5~10ml血液。也可將抽血注射器用配好肝素濕潤(rùn)一下管壁,直接抽血至注射器內(nèi)而使血液不凝。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)作全身抗凝時(shí),一般劑量為:大白鼠2.5~3.0mg/200~300g體質(zhì)量,兔10mg/kg體質(zhì)量,狗5~10mg/kg體質(zhì)量。肝素可改變蛋白質(zhì)等電點(diǎn),因此當(dāng)用鹽析法分離蛋白質(zhì)作蛋白質(zhì)各部分的測(cè)定時(shí),不可采用肝素。市售的*溶液每毫升含肝素12500U,相當(dāng)于100mg。
(1)原理
草酸胺能使血細(xì)胞略為膨大,而草酸鉀能使血細(xì)胞微縮小,因此草酸銨與草酸鉀按3:2比例配置,可使血細(xì)胞體積保持不變;加福爾馬林則能防止微生物在血中繁殖。此抗凝劑zui適于作紅細(xì)胞比積測(cè)定。
(2)配制方法及用量
草酸銨1.2g、草酸鉀0.8g、福爾馬林1.0ml、蒸餾水加至100ml每毫升血加草酸鹽合劑0.1ml(即相當(dāng)草酸銨1.2mg,草酸鉀0.8mg)。根據(jù)取血量將計(jì)算好的草酸鹽劑量加入玻璃容器內(nèi)烤干備用。如取0.5ml于試管,烘干后每管可使5ml血不凝固。
(3)注意事項(xiàng)
草酸的作用在于能夠沉淀血凝過(guò)程中所必需的鈣離子,而達(dá)到抗凝目的。用時(shí)注意加的量應(yīng)適中,不能過(guò)多,以免妨礙去蛋白質(zhì)血濾液的制取。不適用于血液內(nèi)鈣或鉀的測(cè)定,也不能用于血液非蛋白氮測(cè)定。
三、枸櫞酸鈉
常配成3~5%水溶液。也可直接加粉劑,每毫升血加3~5mg,即可達(dá)到抗凝目的。
枸櫞酸鈉可使鈣失去活性,防止凝血。但其抗凝作用較差,堿性較強(qiáng),不宜作化學(xué)檢驗(yàn)之用。僅可用于紅細(xì)胞沉降速度測(cè)定。急性血壓測(cè)定實(shí)驗(yàn)所用枸櫞酸鈉為5~6%溶液。
四、草酸鉀
(一)原理和注意事項(xiàng)
草酸鉀為zui常用的抗凝劑。其與血液混合后可迅速與血液中的鈣離子結(jié)合,形成不溶解的草酸鈣,使血液不凝固。常用于非蛋白氮測(cè)定,但不適用于測(cè)定鉀和鈣。草酸鹽能抑制乳酸脫氫酶、酸性磷酸酶和*的活性,故應(yīng)注意。
(二)配制及使用方法
取草酸鉀10g,加蒸餾水少許使溶解,再加蒸餾水至100ml。配制成10%水溶液,如每管加0.1ml則可使5~10ml血不凝。一般如作微量檢驗(yàn),用血量較少,可配制成2%溶液,如每管加0.1ml可使1~2ml血液不凝。
五、乙二胺四乙酸二鈉鹽(EDTA)
EDTA對(duì)血液中鈣離子有很大的親和力,能與鈣離子絡(luò)合而使血液抗凝。每0.8mg可抗凝1ml血液。除不能用于血漿中鈣、鈉及含氮物質(zhì)之測(cè)定外,適用于多種抗凝。
六、(酸性)檸檬酸葡萄糖溶液B(ACD)(用于新鮮抽提或者是凍存的血樣品,實(shí)驗(yàn)室常用)
檸檬酸鈉:1.32%(M/V)
檸檬酸:0.48%(M/V)
葡萄糖:1.47%(M/V)
ACD抗凝劑為:檸檬酸0.48g、檸檬酸鈉1.32g、葡萄糖1.47g,加水至100ml,滅菌后備用
一般20ML新鮮血液中加入3.5ML ACD抗凝劑。比例依次類(lèi)推??!
血液可以在0度條件下保存數(shù)天,或者是零下70度條件下無(wú)限期保存!
注意事項(xiàng):做全血DNA提取的時(shí)候抗凝劑不能采用肝素!因?yàn)楦嗡厥蔷酆厦告準(zhǔn)椒磻?yīng)的抑制劑!
從全血中制備基因組DNA,ACD做為抗凝劑要優(yōu)于EDTA,因?yàn)樗幽鼙4娓叻肿淤|(zhì)量的DNA,然而,血樣常常被收集于用定量EDTA作為抗凝劑的小管中。
在大多數(shù)美國(guó)的醫(yī)院中,收集血樣的小管均用顏色標(biāo)明是否含有抗凝劑,紫色頂管蓋的小管一般含有抗凝劑,通常是EDTA的干粉。黃色頂蓋的小管不含抗凝劑。
商鋪:http://www.duty-free.cn/st150532/
主營(yíng)產(chǎn)品:葡聚糖凝膠HL-20,白介素elisa試劑盒,腫瘤壞死因子elisa試劑盒,人類(lèi)白介抗原B27,細(xì)胞生長(zhǎng)因子試劑盒
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