本 試 劑 盒 僅 供 研 究 使 用 。
1 使 用 目 的 ：
本 試 劑 盒 用 于 蔬 菜 、 水 果 、 相 應(yīng) 食 物 、 水 及 中 毒 殘 留 物 中 除 蟲 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) 殘 留 的 定
量 檢 測(cè) 。
2 實(shí) 驗(yàn) 原 理
本 試 劑 盒 采 用 競(jìng) 爭(zhēng) E L I S A 方 法 ， 在 微 孔 板 包 被 有 除 蟲 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) 偶 聯(lián) 抗 原 ， 加 入
除 蟲 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) 標(biāo) 準(zhǔn) 品 或 樣 品 ， 游 離 除 蟲 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) 與 微 孔 條 上 預(yù) 包 被 的 擬 除 蟲 菊
酯 ( P y r e t h r o i d s ) 偶 聯(lián) 抗 原 互 相 競(jìng) 爭(zhēng) 抗 除 蟲 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) 抗 體 酶 標(biāo) 記 物 ， 用 T M B 底 物 顯 色 ，
加 入 終 止 液 后 顏 色 由 藍(lán) 色 變 為 黃 色 ， 用 酶 標(biāo) 儀 在 4 5 0 n m 波 長(zhǎng) 下 進(jìn) 行 檢 測(cè) ， 吸 光 值 與 樣 品 中
除 蟲 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) 含 量 成 反 比 ， 通 過(guò) 標(biāo) 準(zhǔn) 曲 線 計(jì) 算 樣 品 中 除 蟲 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) 的 含 量 。
3 試 劑 盒 組 成
3 . 1 預(yù) 包 被 的 除 蟲 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) 偶 聯(lián) 抗 原 的 可 拆 酶 標(biāo) 板 ： 1 塊 （ 1 2 孔 × 8 條 ） 。
3 . 2 除 蟲 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) 標(biāo) 準(zhǔn) 品 ： 6 瓶 （ 1 m l / 瓶 ） ， 含 量 分 別 是 ： 0 n g / m l ,
0 . 0 2 5 n g / m l , 0 . 1 n g / m l , 0 . 2 5 n g / m l , 1 n g / m l , 4 n g / m l 。
3 . 3 抗 除 蟲 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) 抗 體 酶 結(jié) 合 物 ： 1 瓶 （ 6 m l ） 。
3 . 4 顯 色 液 A ： 1 瓶 （ 6 m l ） 。
3 . 5 顯 色 液 B ： 1 瓶 （ 6 m l ） 。
3 . 6 終 止 液 ： 1 瓶 （ 6 m l ） ， 2 M 硫 酸 。
3 . 7 樣 本 稀 釋 液 ： 1 瓶 （ 1 0 × , 6 m l ） ， 用 于 樣 品 稀 釋 用 。
3 . 8 濃 縮 洗 滌 液 ： 1 瓶 （ 2 0 × ， 2 0 m l ） ， 用 于 洗 板 。
3 . 9 說(shuō) 明 書 一 份 。
4 需 要 而 未 提 供 的 材 料
4 . 1 設(shè) 備
4 . 1 . 1 波 長(zhǎng) 4 5 0 n m 酶 標(biāo) 儀 。
4 . 1 . 2 粉 碎 機(jī) 。
4 . 1 . 3 量 筒 。
4 . 1 . 4 振 蕩 器 。
4 . 1 . 5 漏 斗 。
4 . 1 . 6 W h a t m a n N o 1 或 相 當(dāng) 的 濾 紙 。
4 . 1 . 7 微 量 移 液 器 。
4 . 2 試 劑
4 . 2 . 1 去 離 子 水 或 蒸 餾 水 。
4 . 2 . 2 甲 醇 。
5 貯 存
5 . 1 試 劑 盒 貯 存 于 2 ~ 8 ℃ ， 切 勿 冷 凍
5 . 2 未 用 完 的 微 孔 板 應(yīng) 該 密 封 干 燥 保 存
6 注 意 事 項(xiàng)
6 . 1 使 用 試 劑 盒 前 請(qǐng) 仔 細(xì) 閱 讀 說(shuō) 明 書 。
2
6 . 2 不 要 使 用 過(guò) 期 試 劑 盒 。
6 . 3 試 劑 盒 使 用 前 ， 將 試 劑 恢 復(fù) 至 室 溫 （ 2 5 ± 2 ℃ ） ， 建 議 至 少 回 溫 2 小 時(shí) 。
6 . 4 標(biāo) 準(zhǔn) 品 中 含 有 除 蟲 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) ， 使 用 時(shí) 應(yīng) 特 別 注 意 ， 操 作 時(shí) 應(yīng) 帶 手 套 。
6 . 5 終 止 液 中 含 有 硫 酸 ， 使 用 時(shí) 防 止 灼 傷 皮 膚 及 腐 蝕 衣 物 。
6 . 6 不 同 標(biāo) 準(zhǔn) 品 、 樣 品 所 用 吸 頭 不 能 混 用 ， 否 則 會(huì) 影 響 試 驗(yàn) 結(jié) 果 。
6 . 7 不 同 批 號(hào) 試 劑 盒 中 的 試 劑 不 得 混 用 ； 不 同 標(biāo) 準(zhǔn) 品 、 樣 品 所 用 吸 頭 不 得 混 用 ， 否 則 會(huì) 影 響
實(shí) 驗(yàn) 結(jié) 果 。
6 . 8 稀 釋 樣 本 時(shí) 必 須 用 本 試 劑 盒 中 的 樣 本 稀 釋 液 ， 否 則 會(huì) 影 響 實(shí) 驗(yàn) 結(jié) 果
6 . 9 混 合 試 劑 時(shí) 應(yīng) 避 免 起 泡 。
7 工 作 液 準(zhǔn) 備
7 . 1 除 蟲 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) 標(biāo) 準(zhǔn) 品 溶 液 ： 0 n g / m l , 0 . 0 2 5 n g / m l , 0 . 1 n g / m l , 0 . 2 5 n g / m l , 1 n g / m l , 4 n g / m l
7 . 2 濃 縮 洗 滌 液 ： 用 蒸 餾 水 按 1 : 2 0 ( 1 + 1 9 ) 稀 釋 備 用
7 . 3 樣 本 稀 釋 液 ： 用 蒸 餾 水 按 1 : 1 0 ( 1 + 9 ) 稀 釋 備 用
7 . 3 顯 色 劑 ： 已 備 用 ， 避 免 光 線 直 照
7 . 4 反 應(yīng) 終 止 液 ： 已 備 用
8 樣 品 處 理 程 序 （ 樣 品 在 提 取 過(guò) 程 中 ， 要 嚴(yán) 格 按 說(shuō) 明 書 操 作 ， 提 取 過(guò) 程 中 應(yīng) 準(zhǔn) 確 稀 釋 ， 否 則
會(huì) 出 現(xiàn) 結(jié) 果 不 準(zhǔn) 確 ， 樣 品 應(yīng) 當(dāng) 保 存 在 陰 涼 避 光 之 處 及 冷 藏 保 存 ）
8 . 1 取 1 0 g 粉 碎 的 樣 品 ， 加 2 0 m l 7 0 % 甲 醇 溶 液
8 . 2 強(qiáng) 力 振 蕩 3 分 鐘
8 . 3 用 W h a t m a n N o 1 濾 紙 過(guò) 濾
8 . 4 取 2 5 μ l 處 理 后 的 樣 品 ， 加 入 2 5 μ l 樣 本 稀 釋 液 于 反 應(yīng) 孔 中 （ 樣 本 稀 釋 倍 數(shù) 為 2 ）
9 酶 免 分 析 步 驟
9 . 1 實(shí) 驗(yàn) 須 知
9 . 1 . 1 實(shí) 驗(yàn) 開 始 前 請(qǐng) 將 所 有 試 劑 于 盒 外 充 分 恢 復(fù) 至 室 溫 （ 2 5 ± 2 ℃ ） ， 時(shí) 間 約 2 小 時(shí) 。 回 溫 至 室
溫 （ 2 5 ± 2 ℃ ） 后 再 取 出 微 孔 條 ， 多 余 的 微 孔 條 重 新 密 封 立 即 于 2 ~ 8 ℃ 干 燥 保 存
注 ： 一 定 保 證 回 溫 充 分 ， 否 則 影 響 檢 測(cè) 的 精 確 度 和 準(zhǔn) 確 度 。
9 . 1 . 2 使 用 后 請(qǐng) 立 即 將 試 劑 放 回 2 ~ 8 ℃ 保 存
9 . 1 . 3 請(qǐng) 不 要 改 變 分 析 程 序
9 . 1 . 4 請(qǐng) 使 用 精 確 的 微 量 移 液 器
9 . 1 . 5 操 作 一 旦 開 始 ， 請(qǐng) 不 要 中 斷 任 何 程 序
9 . 1 . 6 E L I S A 結(jié) 果 的 可 重 復(fù) 性 極 大 程 度 的 取 決 于 操 作 程 序 ， 請(qǐng) 嚴(yán) 格 按 照 要 求 操 作
9 . 1 . 7 為 避 免 交 叉 污 染 ， 每 個(gè) 標(biāo) 準(zhǔn) 品 和 樣 品 均 應(yīng) 使 用 不 同 的 吸 頭 加 樣
9 . 1 . 8 加 樣 時(shí) 請(qǐng) 勿 讓 吸 頭 接 觸 微 孔 中 的 溶 液 或 內(nèi) 表 面
9 . 2 分 析 步 驟
9 . 2 . 1 預(yù) 先 進(jìn) 行 編 號(hào) ， 標(biāo) 記 B 0 、 標(biāo) 準(zhǔn) 品 和 樣 品 的 位 置 ， 推 薦 進(jìn) 行 雙 孔 檢 測(cè)
9 . 2 . 2 取 所 需 數(shù) 量 的 微 孔 （ 微 孔 條 可 拆 ） ， 將 多 余 板 條 重 新 密 封 并 立 即 放 回 2 ~ 8 ℃ 保 存
9 . 2 . 3 樣 品 稀 釋 液 （ 1 0 × ） 、 濃 縮 洗 滌 液 （ 2 0 × ） 稀 釋 成 工 作 液 ( 蒸 餾 水 或 去 離 子 水 稀 釋 )
9 . 2 . 4 在 B 0 孔 中 加 入 5 0 μ l 0 . 0 n g / m l 標(biāo) 準(zhǔn) 品 溶 液
9 . 2 . 5 在 各 標(biāo) 準(zhǔn) 孔 中 加 入 5 0 μ l 的 標(biāo) 準(zhǔn) 品 溶 液
9 . 2 . 6 在 各 樣 品 孔 中 加 入 5 0 μ l 樣 品 溶 液
9 . 2 . 7 在 所 有 孔 中 加 入 5 0 μ l 的 抗 除 蟲 菊 酯 ( P y r e t h r i n s ) 抗 體 酶 結(jié) 合 物
9 . 2 . 8 輕 輕 晃 動(dòng) 反 應(yīng) 板 幾 秒 鐘 。
9 . 3 3 7 ℃ 溫 浴 3 0 m i n （ 溫 浴 過(guò) 程 中 不 時(shí) 輕 拍 反 應(yīng) 板 ， 可 以 減 少 雙 孔 誤 差 ）
9 . 3 . 1 甩 掉 孔 中 液 體 ， 用 洗 液 洗 滌 微 孔 板 5 次 ， zui 后 一 次 應(yīng) 在 吸 水 紙 上 拍 打 以 完 全 除 去 孔 中 液
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