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技術(shù)文章

ELISA法測定單克隆抗體的效價

閱讀:232發(fā)布時間:2015-4-3

操作步驟

ELISA試劑盒抗原包被:兔抗人IgG 作為抗原,用包被液l:8000稀釋,100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應(yīng)板中。4℃放置。

②洗滌:次日傾去凹孔內(nèi)的液體,洗滌液洗3次。

③封閉:加l00μL/孔封閉液,室溫放置0.5h.

④洗滌:用洗滌液洗3次。

⑤加待測樣品(一抗):將含單克降抗體的細(xì)胞培養(yǎng)上清在另-塊板上用PBS 連續(xù)稀釋(按照1:2或1:10),100μL /孔加到 已包被的板上,ELISA試劑盒每個樣品平行做兩份,PBS 或空白培養(yǎng)基作為陰性對照,已知樣品作為陽性對照。ELISA試劑盒加蓋37℃恒溫箱溫育 1~2h。

⑥洗滌:用洗滌液洗3次。

⑦加酶標(biāo)抗抗體:兔抗鼠IgG-HRP,用封閉液l :8000稀釋,100μL/孔,加蓋37℃恒溫箱溫育1h。

⑧洗滌:用洗滌液洗5次,蒸餾水洗2次。

⑨顯色:加新鮮配制的底物溶液100μL/孔,室溫暗處放置5~30min,顯示藍(lán)色。

ELISA試劑盒終止反應(yīng)、比色:加50μL/孔終止液。顏色變黃;用酶標(biāo)儀測定450nm 處各孔的吸光值,陽性反應(yīng)的zui大稀釋度為待測 
樣品的效價。

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