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技術(shù)文章

如何找到ELISA配對抗體

閱讀：434發(fā)布時間：2016-5-16

    單克隆抗體制備時很多朋友會遇到這樣的問題，即我們免疫用的蛋白為原核表達蛋白而目的蛋白是真核蛋白或病毒等，因為沒有標(biāo)準(zhǔn)品我們做出來的抗體沒有辦法用標(biāo)準(zhǔn)品來驗證是否與其發(fā)生反應(yīng)，zui終導(dǎo)致我們做出的是無用抗體。以下內(nèi)容為我公司實驗室技術(shù)總結(jié)的幾種方法供大家參考，希望對大家有所幫助。
一、若要檢測的抗原為某種新的病毒
方法：1、大量做出該病毒某個蛋白的單克隆抗體；    
      2、大量采集該病毒疑似感染動物或人血液，用PCR的方法進一步確定每份血液是否真的有該病毒存在；  
      3、將你做出的大量抗體中的一個做標(biāo)記作為標(biāo)記抗體，其他所有抗體作為包被抗體，檢測第二步中確定陽性的血清，結(jié)果與陰性血清做對比，并畫出點狀分布圖。若陽性血清大部分的點在陰性血清之上恭喜你找到配對抗體了；若結(jié)果相差不大，請重新標(biāo)記一株抗體做相同實驗。
二、若要檢測抗原為某一細(xì)胞因子
方法：1、通過超表達的方法建立穩(wěn)定表達的細(xì)胞系，注意要在目的蛋白上加相應(yīng)的標(biāo)簽，以便純化。若僅僅是找到配對抗體則不需要純化甚至不需要建立穩(wěn)定表達的細(xì)胞系瞬時轉(zhuǎn)染就可實現(xiàn)，若要進一步作出標(biāo)準(zhǔn)曲線請純化。
     2、 將細(xì)胞系建立后，我們就可以拿到標(biāo)準(zhǔn)品了，做配對工作就相應(yīng)簡單。
     3、若該種細(xì)胞因子可有某種陽性刺激物大量刺激而來，也可不做細(xì)胞系。用陽性刺激物刺激，我們細(xì)胞刺激物的上清液來做標(biāo)準(zhǔn)品也可。


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