實(shí)驗(yàn)說(shuō)明
大腸桿菌中除了不同型細(xì)胞的接合外，同型細(xì)胞F+與F+或*即濃度為使用濃度的50倍。**將稱(chēng)好的藥品分別溶解于670毫升蒸餾水中，待一種藥品溶解后再放另一種藥品，直至全部藥品都溶解，然后加水定容到1.000毫升。***瓊脂的添加量由1.5—2克，根據(jù)瓊脂的質(zhì)量而定。凝固性能好的瓊脂，可少加一些，反之，則要多加一些。Hfr與Hfr也能接合，但重組頻率很低。細(xì)胞中的F因子使細(xì)胞壁的抗原發(fā)生了變化，這些不同于F性菌毛的表面成分阻止了F+與F+細(xì)胞雜交。經(jīng)培養(yǎng)后處于饑餓條件下的F+細(xì)胞喪失了它們的表面排斥性，才能與其它F+細(xì)胞接合（這種改變是暫時(shí)的，一旦在新鮮培養(yǎng)基中，繼續(xù)生長(zhǎng)正常的表面特性又恢復(fù)），這些表型上的“F-細(xì)胞”稱(chēng)為擬表型。在抑制新的F性菌毛和表面成分形成的條件下生長(zhǎng)，如低溫下連續(xù)通氣培養(yǎng)24—48小時(shí)，能增加擬表型的百分?jǐn)?shù)。
實(shí)驗(yàn)步驟
1.菌液制備：
（1）實(shí)驗(yàn)前14—16小時(shí)，從冰箱保存的斜面菌種，挑少量菌于盛有5毫升*液體培養(yǎng)基的三角燒瓶中；每一個(gè)菌株接種一瓶，共接種4瓶，置37℃培養(yǎng)過(guò)夜。
（2）取出培養(yǎng)過(guò)夜的細(xì)菌，在W1177一瓶菌液中加入5毫升新鮮的*培養(yǎng)液，充分搖勻，等量分成2瓶；其余3瓶菌液分別用滅菌的5毫升吸管，各吸出2.5毫升菌液，然后再各加入2.5毫升新鮮的*培養(yǎng)液，充分搖勻，各菌于37℃繼續(xù)培養(yǎng)3—5小時(shí)。
（3）自溫箱取出三角燒瓶，分別倒入離心管，菌株W1177倒二支離心管，其余菌株各倒入一支離心管，離心沉淀，3，500轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘。
（4）倒去上清液，打勻沉淀，加入無(wú)菌水，離心洗滌3次，再加無(wú)菌水到原體積。
2.雜交——混合培養(yǎng)：
（1）取12支滅菌試管，每支吸入3毫升經(jīng)融化的半固體培養(yǎng)基，并保溫在45℃（保溫溫度不宜高，北方氣溫低，可降低半固體中的瓊脂量）。
（2）12支試管分成三個(gè)雜交組合，即W1177×K12pro；W1177×W1485；W1177×HfrC。每個(gè)組合各4支試管，其中2支對(duì)照，2支混合菌液。
（3）對(duì)照組試管各吸F+或Hfr供體菌菌液1毫升，其余按雜交組合各吸供體菌和受體菌菌液0.5毫升，充分混勻。
（4）將各試管中含菌的半固體倒在有Vogel培養(yǎng)基底層的平板上，搖勻待凝，放37℃培養(yǎng)，48小時(shí)后觀(guān)察
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