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技術(shù)文章

植物蛋白質(zhì)的提取方法

閱讀：418發(fā)布時(shí)間：2015-11-19

一、植物組織蛋白質(zhì)提取方法 
  1、根據(jù)樣品重量（1g樣品加入3.5ml提取液，可根據(jù)材料不同適當(dāng)加入），準(zhǔn)備提取液放在冰上。
  2、把樣品放在研缽中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上靜置（3-4小時(shí)）。
  3、用離心機(jī)離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃
  4、提取上清液，樣品制備完成。
  蛋白質(zhì)提取液：300ml
  1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml
  2、甘油（Glycerol）75ml            
  3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g
  這種方法針對(duì)SDS-PAGE，垂直板電泳！

二、植物組織蛋白質(zhì)提取方法 
  氯醋酸—丙酮沉淀法
  1、在液氮中研磨葉片
  2、加入樣品體積3倍的提取液在-20℃的條件下過(guò)夜，然后離心（4℃8000rpm以上1小時(shí)）棄上清。
  3、加入等體積的冰浴丙酮（含0.07%的β-巰基乙醇），搖勻后離心（4℃8000rpm以上1小時(shí)），然后真空干燥沉淀，備用。
  4、上樣前加入裂解液，室溫放置30分鐘，使蛋白充分溶于裂解液中，然后離心（15℃8000rpm以上1小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間以沒(méi)有沉淀為標(biāo)準(zhǔn)），可臨時(shí)保存在4℃待用。
  5、用Brandford法定量蛋白，然后可分裝放入-80℃?zhèn)溆谩?br>    藥品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巰基乙醇的丙酮。裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml滅菌的去離子水中（終體積為5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
    這種方法針對(duì)雙向電泳，雜質(zhì)少，離子濃度小的特點(diǎn)！當(dāng)然單向電泳也同樣適用，只是電泳的條帶會(huì)減少！



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