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上海滬震實業(yè)有限公司
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閱讀:417發(fā)布時間:2017-10-31
免疫組化實驗常見問題和解決方法
染色過強
原因 | 解決方法 |
抗體的濃度過高或抗體孵育時間過長 | 降低抗體滴度(一般指濃縮性抗體) 抗體孵育時間:室溫1小時或4℃過ye |
孵育溫度過高,孵育溫度超過37℃ | 一般室溫20-28℃ |
DAB 顯色時間過長或 DAB 濃度過高 | 顯色時間不能超過5-10分鐘,以顯微鏡下觀察為準(zhǔn) |
非特異性背景染色
原因 | 解決方法 |
操作過程中沖洗不充分 | 每步?jīng)_洗3×5 |
組織中含過氧化物酶未阻斷 | 可再配置新鮮3%H2O2封閉,孵育時間延長 |
組織中含內(nèi)源性* | 正常非免疫動物血清再封閉 |
血清蛋白封閉不充分 | 延長血清蛋白封閉時間 |
染色弱
原因 | 解決方法 |
抗體濃度過低,孵育時間過短 | 提高抗體濃度,孵育時間不能少于60分鐘 |
試劑超過有效使用期 | 及時更換試劑 |
操作中,滴加試劑時緩沖液未瀝干,致使試劑稀釋 | 每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液(但防止切片干燥) |
室溫太低,低于15℃ | 若室溫低于15度,要改放在37℃孵育箱孵育30-60分鐘(或4℃冰箱過ye) |
蛋白封閉過度 | 封閉時間不要超過10分鐘 |
染色陰性
原因 | 解決方法 |
操作步驟錯誤 | 重新試驗,設(shè)立陽性對照 |
組織中無抗原 | 設(shè)立陽性對照片,以驗證實驗結(jié)果 |
一抗與二抗種屬連接錯誤 | 仔細(xì)確定一抗與二抗種屬無誤 |
商鋪:http://www.duty-free.cn/st150152/
主營產(chǎn)品:專業(yè)生產(chǎn)ELISA試劑盒,生化試劑,細(xì)胞株,分子生物學(xué),生化檢測試劑盒,金標(biāo)檢測試劑盒,標(biāo)準(zhǔn)品 ,抗體,等產(chǎn)品 .
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