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Western Blot染色的選擇

閱讀：364發(fā)布時間：2016-11-3

Western Blot染色的選擇

OO.Western Blot哪種染色好？
解答：（1）陰離子染料是zui常用的，特別是氨基黑，脫色快，背景低檢測極限可達到1.5μg，考馬雖然與氨基黑有相同的靈敏度，但脫色慢，背景高。麗春紅S和快綠在檢測后容易從蛋白質(zhì)中除去 ，以便進行隨后的氨基酸分析。缺點是：溶劑系統(tǒng)的甲醇會引起硝化纖維素膜的 皺縮或破壞。不能用語正電賀的膜。靈敏度低。
（2）膠體金，靈敏度高，檢測范圍可到pg級，但染色比穩(wěn)定。
（3）*化靈敏度位于1、2之間，可用于任何一種膜。

7.參照的疑問

PP.是否Western Blot實驗半定量一定要加ACTIN內(nèi)參？
解答：對于發(fā)表文章的實驗加內(nèi)參，實驗嚴謹。

.用BANDSCAN分析結(jié)果行嗎？
解答：分析一般的結(jié)果沒問題。

RR.核內(nèi)抗原Western Blot內(nèi)參選擇什么合適？
解答：可以選用組蛋白，組蛋白在細胞核中的表達是很穩(wěn)定的，有很多都可以當成內(nèi)參，在網(wǎng)上查查就可以選出你要的內(nèi)參。

SS.轉(zhuǎn)膜時采用電流是否比電壓準確，是否根據(jù)0.8mA/cm2，一般1小時左右？
解答：不是的， 半干法*用恒流，一般根據(jù)目的蛋白的大小來確定電流和時間。

TT.做半定量人卵巢癌細胞系的Western Blot，內(nèi)參B-actin，GAPDH，那個好？
解答：選用beta-actin就可以。


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