人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞(NK-92)
貨號：HIMCL-060
細(xì)胞介紹
NK-92 是從一位患有急進性非霍奇金淋巴瘤的 50 歲白人男性外周血單核細(xì)胞衍生來的一株白細(xì)胞介素-2 依賴型 NK 細(xì)胞株。這株細(xì)胞對很多惡性細(xì)胞有細(xì)胞毒性；鉻釋放試驗顯示它能殺死 K562 和 Daudi 細(xì)胞。NK-92 細(xì)胞(經(jīng)過照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的體外免疫清掃而不危及血細(xì)胞的功能。
NK-92 細(xì)胞有以下特征：CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45, CD54 表面標(biāo)記陽性，CD56亮；CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20, CD23, CD34 和HLA-DR
表面標(biāo)記陰性。
細(xì)胞特性
1）來源：惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞
2）形態(tài)：淋巴母細(xì)胞
3）含量：>1x106 個/mL
4）污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
5）規(guī)格：T75 瓶或者 1mL 凍存管包裝
運輸和保存：使用含有胎牛血清的 2ml 凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后，可在 1000RPM，常溫條件下，離心 5min 后，于潔凈操作臺棄去上清，加入*使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至 10cm 培養(yǎng)皿或者 T75 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
細(xì)胞用途：僅供科研使用。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備 RPMI-1640 培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號 21875-091)，75%；添加 0.2mM 肌醇，0.1mM β-Me，0.02mM *，100U IL-2，馬血清 12.5%，胎牛血清，12.5%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱
濕度為 70%-80%。3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按 1：2 到 1：3 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。懸浮細(xì)胞凍存時，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM 條件下離心 4 分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入 10%DMSO 后進行凍存。
注意事項：
- 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們。
- 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
