細(xì)胞傳代培養(yǎng)總結(jié)
1、什么是細(xì)胞培養(yǎng)
培養(yǎng)的細(xì)胞由于細(xì)胞增殖，數(shù)量增加，細(xì)胞難以繼續(xù)生長(zhǎng)繁殖，需要進(jìn)行分瓶培養(yǎng)，將培養(yǎng)的細(xì)胞分散，以1:2或1:3以上的比率轉(zhuǎn)移到另外的容器中進(jìn)行培養(yǎng)，即為傳代培養(yǎng)，一般細(xì)胞可傳代10-50代
2、細(xì)胞的貼壁過(guò)程
3、培養(yǎng)細(xì)胞的一代生長(zhǎng)過(guò)程
①潛伏期：細(xì)胞從接種到貼壁生長(zhǎng)繁殖的一段時(shí)間
二倍體細(xì)胞系該段時(shí)間較長(zhǎng)，大概為24-96h；連續(xù)細(xì)胞系時(shí)間短，大概10-30min
②指數(shù)生長(zhǎng)期：細(xì)胞增殖zui旺盛時(shí)期，此時(shí)進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)較佳
指數(shù)生長(zhǎng)期持續(xù)3-5d后，隨細(xì)胞數(shù)量不斷增多，生長(zhǎng)空間日趨減少，細(xì)胞相互接觸匯合成片，呈現(xiàn)接觸抑制。而惡性細(xì)胞則無(wú)接觸抑制現(xiàn)象；癌細(xì)胞則由于營(yíng)養(yǎng)成分的消耗和細(xì)胞代謝產(chǎn)物的影響而發(fā)生密度抑制。
③停滯期：細(xì)胞數(shù)量達(dá)到飽和密度后，細(xì)胞與營(yíng)養(yǎng)液的交換面積減少，代謝產(chǎn)物積累，pH下降細(xì)胞停止增殖，進(jìn)入停滯期。此時(shí)應(yīng)該進(jìn)行細(xì)胞傳代，但是得傳1-2代細(xì)胞才能恢復(fù)。
4、細(xì)胞傳代的一般步驟
a、懸浮細(xì)胞
可采用加入等量新鮮培養(yǎng)基后直接吹打分散進(jìn)行傳代，或用離心法后，加入新培養(yǎng)基后再吹打分散進(jìn)行傳代
b、貼壁細(xì)胞
①實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備，超凈臺(tái)噴灑酒精，紫外照射30min。準(zhǔn)備好培養(yǎng)瓶/皿，離心管，10%DMEM，0.25%*，D-hanks液等，帶上手套，口罩等
②倒去舊培養(yǎng)基，用D-hanks液清洗一遍，去除沉積的死細(xì)胞等
③加入2ml 0.25％*消化液，消化2～3min，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞單層收縮突起出現(xiàn)空隙時(shí)，倒去酶液。
④加入1～2滴管含有血清的培養(yǎng)液，反復(fù)吹打細(xì)胞，使其成細(xì)胞懸液
⑤以1：2或1：3進(jìn)行分裝，補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)基，并在培養(yǎng)瓶上做好標(biāo)記，注明代號(hào)、日期，輕輕搖勻，37 ℃CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
⑥細(xì)胞培養(yǎng)24h后，即可觀察培養(yǎng)液的顏色及細(xì)胞的生長(zhǎng)情況
5注意事項(xiàng)
①傳代培養(yǎng)時(shí)要注意無(wú)菌操作并防止細(xì)胞之間的交叉污染。所有操作要盡量靠近酒精燈火焰。每次只進(jìn)行一種細(xì)胞的操作。每一種細(xì)胞使用一套器材。培養(yǎng)用液應(yīng)嚴(yán)格分開(kāi)。
②傳代時(shí)間的掌握：每天觀察細(xì)胞形態(tài)，掌握好細(xì)胞是否健康的標(biāo)準(zhǔn)：健康細(xì)胞的形態(tài)飽滿，折光性好，生長(zhǎng)致密時(shí)即可傳代。
③消化時(shí)間的掌握
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