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技術(shù)文章

細(xì)胞復(fù)蘇流程

閱讀：602發(fā)布時(shí)間：2017-6-5

細(xì)胞復(fù)蘇流程

復(fù)蘇操作步驟：
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
1.將水浴鍋預(yù)熱至37℃
2.用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺(tái)臺(tái)面。
3.在超凈工作臺(tái)中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等
迅速解凍：
1.    迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍，并要不斷的搖動(dòng)，使管中的液體迅速融化，時(shí)間控制在1分鐘左右
離心去除凍存液：
1．  融解好的細(xì)胞迅速放進(jìn)離心機(jī)中，2000r/min 或者600g離心2min
2．  吸棄上清液。
3．  用4-5ml*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，吹打制成單細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度以5×105/ml為宜。
4．  將復(fù)蘇好的細(xì)胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，將培養(yǎng)瓶放入37℃和5％CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)，8-24小時(shí)后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)，換液的時(shí)間由細(xì)胞生長(zhǎng)情況而定。


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