基因的表達受到多種轉(zhuǎn)錄因子及其相關(guān)蛋白的調(diào)控， 基因表達調(diào)控常用研究方法包括轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合實驗、 電泳遷移阻滯實驗、 酵母單雜交系統(tǒng)和染色質(zhì)免疫共沉 淀 技 術(shù)。盡管這4種方法均可以鑒定轉(zhuǎn)錄因子在DNA 中的結(jié)合位點， 但前3種方法需要將DNA與轉(zhuǎn)錄因子分離到體外進行實驗， 無法真實地反映在不同生理狀態(tài)下， 轉(zhuǎn)錄因子與相應靶基因識別與結(jié)合的真實情況。

ChIP技術(shù)通過甲醛交聯(lián)， 將某一時刻DNA與轉(zhuǎn)錄因子之間的作用情況“ 快照” 下來， 可真實、 完整地反映特定時刻下， 目的蛋白在全基因組序列中的結(jié)合情況， 因此，近年來該技術(shù)得到越來越廣泛的應用。ChIP研究多以細胞系或從組織分離培養(yǎng)所得的細胞為材料， 但離體培養(yǎng)的細胞無法*模擬體內(nèi)細胞相應的生理狀態(tài)， 無法排除細胞培養(yǎng)過程中對基因表達及其調(diào)控產(chǎn)生的影響。已有直接將組織作為elisa試劑盒

ChIP材料、 避免細胞培養(yǎng)可能產(chǎn)生的潛在影響的報道。目前有關(guān)組織ChIP方法遠不及以細胞 ChIP方法成熟， 相關(guān)研究報道也較少， 同時急需進一步研究完善適合不同組織的ChIP方法。

ChIP技術(shù)通過甲醛交聯(lián)固定結(jié)合在染色質(zhì)上的蛋白， 經(jīng)細胞裂解、 染色質(zhì)斷裂， 用結(jié)合有相應抗體的沉降珠捕獲并分離目的蛋白DNA復合物， zui后經(jīng)反交聯(lián)、 純化后， 得到與目的蛋白結(jié)合的 DNA片段。目前大多數(shù)利用 ChIP技術(shù)對DNA與蛋白之間相互作用進

行的研究均是以細胞為材料， 將活體組織作為ChIP材料的報道較少， 尚未有以乳腺組織為 ChIP材料的報道。與脾臟等組織不同， 乳腺組織中含有大量乳腺纖維， 致使樣品均一化處理時難以分離得到呈單一狀分布的細胞， 且細胞容易破損， 回收率低。泌乳期乳腺細胞裂解后， 裂解液中含有大量的乳脂和乳蛋白， 嚴重影響雜交效率。超聲法斷裂染色質(zhì)過程中易產(chǎn)生積熱、 易導致反交聯(lián)和蛋白質(zhì)變性， 因此對超聲波儀的溫控要求較高。

針對以上問題， 研究人員以Stat為目的蛋白對傳統(tǒng)的組織染色質(zhì)免疫共沉淀方法進行了改進， 尋找適合乳腺組織的染色質(zhì)免疫共沉淀方法。

研究人員省略組織均一化步驟、 用酶切 超聲法代替超聲法進行染色質(zhì)片段化、 在細胞裂解和酶切步驟間增加洗滌步驟。結(jié)果顯示， 與脾臟組織相比， 乳腺組織不適合進行組織均一化處理。酶切 超聲法比超聲法更適于對乳腺組織進行染色質(zhì)片段化。采用改進后的 ChIP方法獲得的DNA樣品中， 靶序列得到顯著的富集， 所得的DNA樣品能夠滿足測序（ChIP Seq） 要求。結(jié)果說明， 改進后的方法適用于乳腺組織染色質(zhì)免疫共沉淀。elisa試劑盒

研究人員認為，利用改進后的方法， 將乳腺組織經(jīng)抗體與磁珠耦合、 組織處理、 交聯(lián)、 酶切 超聲裂解、 孵育、洗滌、 反交聯(lián)和純化共8步處理后， 經(jīng)QPCR方法證實， 得到了富集有 Stat靶序列片段的DNA片段， 且樣品質(zhì)量達到華大公司對ChIP樣品的測序要求。測序分析結(jié)果顯示， 利用改進后的ChiP方法獲得的樣品數(shù)據(jù)背景干凈、 峰形顯著、 重復性高， 可滿足ChIP Seq要求。elisa試劑盒

這些結(jié)果說明， 改進后的方法適用于乳腺組織染色質(zhì)免疫共沉淀， 該方法為研究乳腺基因表達調(diào)控奠定了基礎(chǔ)。