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182次大鼠 Bcl-2 相關(guān) X 蛋白(BAX) 試劑盒
1. 修復(fù)后緩沖液須自然冷卻,自來(lái)水沖洗后方能把切片取出,驟冷有可能導(dǎo)致
結(jié)晶或抗原封閉。
2. 緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到,用過(guò)的檸檬酸緩沖液不能反復(fù)使
用。
3. 若試劑為微量濃縮液,用前應(yīng)低速離心,將內(nèi)蓋和管壁附著的溶液離到底部。
4. 封片前一定要換用 TBS 充分洗滌,以便洗去組織上殘留的 Tween 20,否則會(huì)
影響結(jié)果觀察。
5. 如須復(fù)染細(xì)胞核,則在封片前復(fù)染或直接采用含有染核試劑的封片劑進(jìn)行封
片。
抗原修復(fù)方法
常用抗原修復(fù)液:檸檬酸緩沖液(0.01M pH6.0)、EDTA 抗原修復(fù)液(pH8.0 或
9.0)等等。
一、酶消化修復(fù)法酶消化修復(fù)
切片脫蠟水化處理,TBS 沖洗,在組織上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶,37℃孵育
20~30min 后 TBS 沖洗即可。
二、微波抗原修復(fù)法
微波盒中加入抗原修復(fù)液微波加熱至沸騰,將脫蠟水化后的切片置于耐高溫塑料
切片架上,放入已沸騰的緩沖液中,中檔或繼續(xù)微波 10~15min,取出微波
盒冷卻至室溫后,自來(lái)水沖洗,取出切片。因不同微波爐微波處理時(shí)間存在差異,
須自行調(diào)整。
三、直接高壓抗原修復(fù)法
取修復(fù)液于不銹鋼高壓鍋中加熱至沸騰,將組織切片置于耐高溫切片架上,修復(fù)
液沸騰后放入切片架,蓋上鍋蓋,待噴氣后計(jì)時(shí) 1.5~2.5min 即可脫離熱源,自
然冷卻至室溫后自來(lái)水沖洗,取出切片。此方法適用于較難檢測(cè)或核抗原的修復(fù)。
四、隔水式高壓抗原修復(fù)法
不銹鋼高壓鍋中加自來(lái)水加熱至沸騰,微波盒中加入修復(fù)液于微波爐中加熱至沸
騰,將切片放入微波盒中,再將微波盒放入高壓鍋中蓋上鍋蓋,待噴氣后計(jì)時(shí)
4~8 min 即可關(guān)閉熱源,自然冷卻至室溫后自來(lái)水沖洗,取出切片。此方法適用
于較難檢測(cè)或核抗原的修復(fù)。
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