elisa檢測試劑盒實驗時要注意的問題
1、試劑不能與手觸摸。
2、要用潔凈的藥勺，量筒或滴管取用試劑，一定禁絕用同一種東西一起接連取用多種試劑。取完一種試劑后，應將東西洗凈、擦干后，方可取用另一種試劑。
3、試劑取用后一定要將瓶塞蓋緊，不行放錯瓶蓋和滴管，絕不允許張冠李戴，用完后將瓶放回原處。
4、已取出的試劑不能再放回原試劑瓶內。
5、精細或難洗的玻璃儀器，滴定管、移液管、量瓶、比色管、玻璃垂熔漏斗等，先用自來水沖刷后，瀝干，再用鉻酸清洗液處理一段時間，然后用自來水清洗，zui后用純化水沖刷3次。 
具體步驟
1.選取18個酶標孔，分為標準組和樣品組，依次分別標號1-7,8-9，均設置重復管號。樣品實驗前可做適當稀釋或濃縮，樣品可取2個不同濃度梯度。標號為8-9。標準組各管分別加入50 μl各濃度的磷酸化標準蛋白溶液；樣品組分別加入50μl磷酸化蛋白樣品。 
2.各管加入50 μl 2.0 mol/L NaOH，混勻。 65℃水浴，保溫30 min。 
3.待溶液冷卻至室溫后，各管加入50 μl  4.7 mol/L HCl，混勻。 
4.各管加入50 μl檢測液，混勻。室溫靜置30 min，期間混勻1-2次，進行吸光度值檢測前再混勻1次。
5.以0號管作為空白對照，在分光光度計上測各管的A620值。 
6.以標準組各管A620平均值為縱坐標，對應的磷酸化標準蛋白終濃度為橫坐標，在酶標儀上或Microsoft Excel軟件中繪制標準曲線，由樣品管各管A620平均值計算樣品中磷酸化蛋白的濃度。 
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