elisa檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)操作步驟解析
一、樣品的保存
用于ELSIA檢測的樣本非常廣泛，包括各種動物組織、動物體液以及其他食品提取物等。有些樣本可以直接通過簡單離心、稀釋，有些則需要經(jīng)過理化方法進(jìn)行提取。檢測樣品應(yīng)保證新鮮，經(jīng)前處理的提取液應(yīng)及時(shí)進(jìn)行檢測，時(shí)間越長，提取液中的抗原的效價(jià)越低。如不及時(shí)檢測，應(yīng)及時(shí)放4℃冰箱保存。防止細(xì)菌污染，因菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，可能會導(dǎo)致假陽性反應(yīng)。如在冰箱中保存過久，其中的HRP可能發(fā)生聚合，在間接法ELSIA檢測中可使本底加深。所以標(biāo)本如需保存做多次檢測，宜采用少量分裝冰箱保存。組織樣本若不及時(shí)做處理，應(yīng)該放置-15℃冰箱保存。
二、試劑的準(zhǔn)備
嚴(yán)格按照試劑盒的說明書的要求準(zhǔn)備好需要用到的試劑。LEISA檢測中應(yīng)采用蒸餾水或者去離子水，洗滌用水應(yīng)新鮮和高質(zhì)量，注意查看是否需要和洗滌液進(jìn)行稀釋。自配的緩沖液應(yīng)用PH計(jì)測量校正。從冰箱取出的試劑必須與室溫平衡方可使用。試劑盒中本次試驗(yàn)不需要的試劑部分及時(shí)放回冰箱保存。三、加樣
在ELSIA加樣步驟中，應(yīng)加所加物加到ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。加標(biāo)本一般使用微量加樣器，按規(guī)定的量加入孔板中。每次加標(biāo)本必須更換槍頭，以免交叉污染。加酶標(biāo)記物和底物液時(shí)可用定量多道加樣器，使加樣過程迅速完成。
四、溫育
溫育的方式一般采用水浴，可將酶標(biāo)板置于水浴箱中，酶標(biāo)板底貼著水面，是溫度迅速平衡。為避免蒸發(fā)，酶標(biāo)板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封或者保鮮膜覆蓋板孔，此時(shí)可讓反應(yīng)板漂浮在水面上。若保溫箱，酶標(biāo)板應(yīng)放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性能良好的材料或者如金屬等，在盒底墊濕的紗布，將酶標(biāo)板放在紗布上。這樣能保證穩(wěn)定迅速平衡。無論水浴還是濕盒溫育，反應(yīng)板均不宜疊放，以保證各板的溫度能迅速平衡。室溫溫育的反應(yīng)，操作時(shí)的室溫要嚴(yán)格限制在室溫的范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)室溫溫度是指20℃-25℃，具體的操作時(shí)間根據(jù)說明書的要求嚴(yán)格控制溫育。
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