ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)室了解本室工作質(zhì)量

    ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作的zui后步驟就是根據(jù)得出的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，做出擬合曲線，計(jì)算濃度。這個(gè)步驟可以借用專業(yè)制作曲線軟件進(jìn)行分析，如curve expert 1.3，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式，ELISA試劑盒將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

方法一　用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法:

    1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌，下同)。

    2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔)。

    3.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。

    4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。

   5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

    6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)O·D值：在ELISA試劑盒檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O·D值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽性。

1、 派觀察員到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行試劑調(diào)查

這種調(diào)查事先不通知，臨時(shí)派觀察員到實(shí)驗(yàn)室，采用常規(guī)方法，檢驗(yàn)規(guī)定的一組標(biāo)本，進(jìn)行評(píng)價(jià)。

   這種調(diào)查方式，容易發(fā)現(xiàn)該實(shí)驗(yàn)室存在的實(shí)際問題，可以直接給予指導(dǎo)和幫助，解決問題，提高檢驗(yàn)質(zhì)量。這種調(diào)查通?？梢允褂谜鎸?shí)樣本，避免采用質(zhì)控物的一些缺點(diǎn)。
2、 發(fā)質(zhì)控物進(jìn)行調(diào)查

    這是國(guó)內(nèi)外室間質(zhì)評(píng)的常用形式。部臨檢中心對(duì)乙肝標(biāo)志物ELISA試劑盒檢驗(yàn)的室間質(zhì)評(píng)采用定期發(fā)放質(zhì)控物至各ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)室，各實(shí)驗(yàn)室在規(guī)定的日期進(jìn)行檢驗(yàn)，并將檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)至部臨檢中心。部臨檢中心經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，將評(píng)價(jià)結(jié)果寄回各實(shí)驗(yàn)室。通過評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)差距，并設(shè)法改進(jìn)，以不斷提高檢驗(yàn)質(zhì)量。