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中級(jí)會(huì)員 | 第12年

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動(dòng)物組織總蛋白提取

時(shí)間：2021/12/21閱讀：643
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　　變性總蛋白提取（SD-001）
 
　　以下步驟是從 15-20 mg 組織中提取，對(duì)于昆蟲(chóng)組織，例如果蠅，使用 15-20 個(gè)幼蟲(chóng)，蛹或成蟲(chóng)樣本。如果起始量較大或者較小，需調(diào)整相應(yīng)裂解液的用量比例。
 
　　1. 將離心管柱及接收管套管放在冰上預(yù)冷
 
　　2. 將 15-20 mg 組織放置于離心管柱上，用塑料棍扭轉(zhuǎn)研磨 50-60 次，加入 200ul 細(xì)胞裂解液，繼續(xù)研磨 30-60 次。(組織用量不要過(guò)量，無(wú)需過(guò)度研磨，裂解液可分兩次加入以得到最佳效果)注意：塑料研磨棒可以重復(fù)使用，用蒸餾水*沖洗干凈，用紙巾擦干。
 
　　3. 蓋上蓋子室溫孵育 1-2 分鐘，14000-16000rpm 離心 1-2 分鐘取出。
 
　　4. 立刻將收集管放置于冰上，棄去離心管柱，蛋白提取完成可應(yīng)用于下游實(shí)驗(yàn)。
 
　　請(qǐng)注意：部分未*裂解的組織不會(huì)影響樣品質(zhì)量。
 
　　天然總蛋白提?。⊿N-002）
 
　　1. 將天然細(xì)胞裂解液(SN-002)，離心管柱及接收管套管放在冰上預(yù)冷。
 
　　2. 將 15-20 mg 組織放置于離心管柱上，用塑料棍扭轉(zhuǎn)研磨 50-60 次，加入 200ul 天然細(xì)胞裂解液(SN-002)，繼續(xù)研磨 30-60 次。(組織用量不要過(guò)量，無(wú)需過(guò)度研磨，裂解液可分兩次加入以得到最佳效果)。注意：塑料研磨棒可以重復(fù)使用，用蒸餾水*沖洗干凈，用紙巾擦干。
 
　　3. 開(kāi)蓋冰上孵育 5 分鐘，蓋上蓋子，4℃，14000-16000rpm 離心 1-2 分鐘取出。
 
　　4. 立刻將收集管放置于冰上，棄去離心管柱，蛋白提取完成可應(yīng)用于下游實(shí)驗(yàn)。
 

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