大鼠冠狀動脈內(nèi)皮細胞運輸和保存：

1、1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。

2、T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

 大鼠冠狀動脈內(nèi)皮細胞生理變化：

（1）       主動脈硬化。

（2）       主動脈瘤

（3）       主動脈鈣化。

 大鼠冠狀動脈內(nèi)皮細胞基本特性：

（1）       組織來源于正常大鼠大動脈組織。

（2）       鑒定：肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin免疫熒光染色。

（3）       原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。

（4）       每凍存管細胞數(shù)：>5×105 cells/1ml。

（5）       肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin免疫熒光染色驗證。

（6）       不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

 大鼠冠狀動脈內(nèi)皮細胞操作流程：

1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。

2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應經(jīng)過無核酶處理。

3. 每次實驗應該設置陰、陽性對照。

4. 試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心。

5.  大鼠冠狀動脈內(nèi)皮細胞內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用前應全部轉(zhuǎn)移至標本準備區(qū)，并單獨存放。

6. 為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進行任何標記。

7. 儀器 擴增相關參數(shù)應按照本說明書相關要求進行設置；不同批號試劑不能混用。

8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。

9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。