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ELISA試劑盒
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elisa檢測試劑盒反應(yīng)步驟與注意事項

時間:2020/12/16閱讀:752
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elisa檢測試劑盒實驗原理:

將目標抗體包被于微孔板中,制成固相載體,向微孔中分別加入標準品或標本,其中的目標連接于固相載體上的抗體結(jié)合,然后加入微生物化的目標抗體,將未結(jié)合的生物素抗體洗凈后,加入HRP標記和親和素,再次*洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(O.D.值),計算樣品濃度。

 

elisa檢測試劑盒反應(yīng)步驟:

(1)嚴格按照試劑說明書進行操作。操作前將試劑在室溫下平衡30~60min。

(2)加樣后及時放人孵箱。標本較多時,要分批操作。按說明步驟嚴格控制操作時間,防止孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。

(3)封板溫育時,各孔一定要封嚴,防止陽性標本的液體蒸發(fā),產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“花板"的出現(xiàn)。 

(4)用洗板機洗板時,保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干:還要防止針口有纖維蛋白或異物,ELISA試劑盒這些異物在洗板的過程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板"的出現(xiàn)。

(5)合理安排檢測量,以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。

(6)加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。

(7)顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用。

(8)加樣時保持顯色劑不外流;A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。

(9)應(yīng)保證酶標板清潔,整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸。以上的措施可以使“花板"降至zui低限度。elisa檢測試劑盒從而提高檢測的特異性。并得到更準確、可靠的實驗結(jié)果。

elisa檢測試劑盒注意事項:

在收集標本前必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成分是否足夠穩(wěn)定,我們提倡新鮮標本盡早檢測,對收集后當天就進行檢測的標本,請及時儲存在4℃的條件下備用,如有特殊原因需要周期收集標本,請在造模取材后,將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保持。因冰室與室溫存在一定的溫差,蛋白極易降解,直接影響實驗質(zhì)量,所以請避免反復(fù)凍融。有代測需求的客戶,取材前請務(wù)必和我司銷售人員索要說明書,具體操作事項請與我司技術(shù)人員保持溝通。

 

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