elisa檢測(cè)試劑盒檢測(cè)原理：

elisa檢測(cè)試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)技術(shù)。胰島素捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)同時(shí)加入標(biāo)本或參考品和HRP耦連的抗抗體時(shí)，其中的不同位點(diǎn)會(huì)與捕獲抗體和HRP的抗抗體結(jié)合，形成夾心復(fù)合物，錨定在固相載體板上，其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。后加入顯色劑，若樣本中存在將會(huì)形成免疫復(fù)合物，辣根過氧化物酶會(huì)催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測(cè)，讀其450nm處的OD值，濃度與OD450值之間呈正比，通過參考品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照未知樣本中OD值，即可算出標(biāo)本中濃度

elisa檢測(cè)試劑盒準(zhǔn)備試劑與收集血樣：

1.  收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復(fù)凍融。 正常標(biāo)本測(cè)定前用 標(biāo)本 稀釋液作 1： 1 0 稀釋（取 2 0ul，加 標(biāo)本 稀釋液 18 0ul,稀釋 1 0倍）。

2.  標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 2 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管，第一管加標(biāo)本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入elisa檢測(cè)試劑盒標(biāo)本稀釋液 500ul 。在第一管中加入 2 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二 管 。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋，從第七 管中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對(duì)照。

3.  10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

elisa檢測(cè)試劑盒檢測(cè)程序：

1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液elisa檢測(cè)試劑盒將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。

3.  每孔中加入第一抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

6.  洗板：同前。

7.  每孔加入底物工作液100ul ，置 37   ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。

8.  每孔加入100ul 終止液混勻。

9.  30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0 nm 處測(cè) 吸光值。