elisa酶聯(lián)免疫試劑盒測(cè)定步驟
使用前將所有IL-6ELISA試劑盒和樣本平衡至室溫。推薦所有的樣本、標(biāo)準(zhǔn)和對(duì)照測(cè)定雙份。
1. 準(zhǔn)備所有的試劑和工作標(biāo)準(zhǔn)品。
2. 取下多余的微量培養(yǎng)板條，放回裝有干燥劑的錫箔袋中，重新密封。
3. 每孔加入100ul Assay Diluent RD1W。
4. 每孔依次加入100ul 標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和對(duì)照。用橡皮條密封。室溫孵化2小時(shí)。記錄測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)和樣本的分布。
5. 吸棄孔內(nèi)液體，每孔400ul洗滌液，充分洗滌后*去除液體。在干凈的紙上拍干。反復(fù)洗滌4次。
6. 每孔加入200ul IL-6 Conjugate。用新的橡皮膏條密封。室溫溫浴2小時(shí)。
7. 重復(fù)步驟5。
應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中白介素6(IL-6)水平。用純化的白介素6(IL-6)抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被單抗的微孔中依次加入白介素6(IL-6)，再與HRP標(biāo)記的白介素6(IL-6)抗原結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白介素6(IL-6)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中白介素6(IL-6)濃度。
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