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1、蛋白質(zhì)濃度:
ELISA試劑盒蛋白質(zhì)濃度過大,鹽析時發(fā)生共沉現(xiàn)象,分離效果不好。蛋白質(zhì)濃度太稀,耗鹽量過大,蛋白質(zhì)回收率低。一般蛋白質(zhì)濃度在2.5%~3.0%較適中。
2、離子強度:
離子強度越大,蛋白質(zhì)的溶解度越低,越容易產(chǎn)生鹽析現(xiàn)象。
3、離子類型:
離子半徑小而價數(shù)高的離子,對鹽析影響較強。離子半徑大而價數(shù)低的離子,對鹽析影響較弱。
4、PH值:
ELISA試劑盒蛋白質(zhì)所帶凈電荷越多,溶解度越大。凈電荷為零時,溶解度zui低。一般將PH值調(diào)到蛋白質(zhì)等電點附近,這樣有利于鹽析。
5、溫度:
ELISA試劑盒低離子強度或水中,在一定范圍內(nèi)蛋白質(zhì)的溶解度隨著溫度的升高而增大。高鹽溶液中,蛋白質(zhì)的溶解度隨著溫度的升高有時反而下降。一般情況下在0~4℃操作。
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