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公司動(dòng)態(tài)

平板菌落計(jì)數(shù)

閱讀：422發(fā)布時(shí)間：2015-3-16

一、培養(yǎng)基和試劑 
平板計(jì)數(shù)瓊脂、75%乙醇、磷酸鹽緩沖稀釋液

二、操作程序

1.樣品制備

（1）ELISA以無(wú)菌操作取有代表性的樣品盛于滅菌容器內(nèi)。如有包裝，則用75%乙醇在包裝開(kāi)口處擦拭后取樣。

（2）制備樣品勻液：以無(wú)菌操作取25g樣品，放入裝有225ml稀釋劑的滅菌均質(zhì)杯內(nèi)，于8000r/min均質(zhì)1-2min，制成1:10的樣品勻液。如樣品均質(zhì)時(shí)間超過(guò)2min，應(yīng)在均質(zhì)杯外加冰水冷卻。

（3）稀釋樣品勻液：用10ml滅菌吸管準(zhǔn)確吸取1:10的樣品勻液10ml，放入裝有90ml稀釋劑的150ml 稀釋瓶中。迅速振搖，將樣品混勻，制成1:100的樣品勻液。振搖時(shí)，幅度為30cm，7s內(nèi)振搖25次。從容器中吸取樣品勻液和以后的稀釋操作中，吸管尖不要碰著瓶口。吸入的液體應(yīng)先高于所要求的刻度，然后提起吸管使其離開(kāi)液面并貼在容器內(nèi)壁將液體調(diào)至所要求的刻度。

2.平板接種

（1）對(duì)于每個(gè)樣品，選用合適的三個(gè)連續(xù)稀釋度的樣品液進(jìn)行平板計(jì)數(shù)。

（2）分別用滅菌吸管吸取1ml樣品液放入作了適宜標(biāo)志的平皿內(nèi)。每個(gè)稀釋度的樣品液用兩個(gè)平皿。

（3）ELISA分別加12-15ml平板計(jì)數(shù)瓊脂（約45℃左右）到平皿內(nèi)。立即將平皿內(nèi)的樣品液和瓊脂培養(yǎng)基充分混合。要防止把混合物濺到平皿壁和蓋上。同時(shí)將平板計(jì)數(shù)瓊脂傾入加有1ml稀釋劑的另一滅菌平皿作空白對(duì)照。將樣品液加入平皿后應(yīng)立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，每個(gè)樣品從開(kāi)始稀釋到傾注zui后一個(gè)平皿所用的時(shí)間不得超過(guò)20min。

3.培養(yǎng)

待瓊脂凝固后將平皿翻轉(zhuǎn)，立即放進(jìn)36±1℃的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)48±2h。培養(yǎng)箱應(yīng)保持一定的濕度，經(jīng)48h培養(yǎng)的瓊脂培養(yǎng)基的失重不得超過(guò)15%。


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