ELISA試劑盒操作技術(shù)
操作過程的控制：①嚴(yán)格按照試劑說明操作。操作前將試劑在室溫下平衡30～60 min。②加樣后及時(shí)放入孵箱。標(biāo)本較多時(shí)，要分批操作。防止孵育時(shí)間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。③封板溫育時(shí)，各孔一定要封嚴(yán)，ELISA試劑盒防止陽性標(biāo)本的液體蒸發(fā)，產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“盎”灞的出現(xiàn)。④用洗板機(jī)洗板時(shí)，保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；還要防止針口有纖維蛋白或異物，這些異物在洗板的過程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象。⑤合理安排檢測(cè)量，以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。⑥加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。⑦顯色劑盡量在臨用前配制，不使用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)的TM顯色劑不用。⑧加樣時(shí)保持顯色劑不外流；A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。加終止液時(shí)要避免產(chǎn)生氣泡。⑨應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔，整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸。以上的措施可以得到更準(zhǔn)確、更可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。加樣吸嘴的潔凈與否和吸量的準(zhǔn)確性直接影響檢測(cè)結(jié)果。
由于吸嘴構(gòu)造特殊，導(dǎo)致清洗困難，加大了交叉污染的機(jī)會(huì)。建議用一次性吸嘴。加樣器也要經(jīng)常清洗，定期校準(zhǔn)。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出。
溫浴影響。在建立ELISA試劑盒方法時(shí)做反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究。實(shí)驗(yàn)表明，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1～2 h，產(chǎn)物的生成可達(dá)。為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔。反應(yīng)板孔、反應(yīng)板不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡。溫育的溫度和時(shí)間應(yīng)嚴(yán)格按規(guī)定控制，特別要注意邊緣位置。96孔酶標(biāo)板結(jié)構(gòu)特別，易產(chǎn)生邊緣效應(yīng)，抗原抗體結(jié)合及酶促反應(yīng)對(duì)溫度有嚴(yán)格要求，酶標(biāo)板周邊孔與內(nèi)部孔升降溫速率不同，造成周邊與內(nèi)部孔結(jié)果差異；干浴與水浴存在明顯的差異，盡可能使用水浴，并要求固相板放入水中，減少受熱不均，貼密封膜，防止污物浸入。
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