農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法
將外植體放入含有外源基因的農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtume／ociens)菌液中浸泡,然后轉(zhuǎn)入共培養(yǎng)基,再轉(zhuǎn)入篩選培養(yǎng)基誘導(dǎo)抗性愈傷組織和抗性芽,植物ELISA試劑盒生根后的抗性植株移栽至營養(yǎng)缽生長.
基因槍法
又稱微彈轟擊法.其基本原理是將外源DNA黏附在微小的金?；蜴u粒表面,然后在高壓的作用下,微粒被高速射入受體細(xì)胞或組織,微粒上的外源DNA進(jìn)入細(xì)胞后,整合到植物染色體上,得以表達(dá),從而實(shí)現(xiàn)基因的轉(zhuǎn)化.
花粉管通道法
在植物授粉時將含目的基因的DNA溶液涂于柱頭上,利用植物在開花、受精過程中形成的花粉管通道,將外源DNA導(dǎo)入受精卵細(xì)胞,并進(jìn)一步地整合到受體細(xì)胞的基因組中,隨著受精卵的發(fā)育而成為含轉(zhuǎn)基因的新個體.該方法于80年代初期由我國學(xué)者周光宇提出.我國目前推廣面積zui大的轉(zhuǎn)基因抗蟲棉就是用花粉管通道法培育出來的.該法的zui大優(yōu)點(diǎn)是不依賴組織培養(yǎng)人工再生植株,技術(shù)簡單,不需要裝備精良的實(shí)驗(yàn)室,常規(guī)育種工作者易于掌握.
微注射法
首先制備植物原生質(zhì)體,游離出細(xì)胞,在倒置顯微鏡和顯微操作器的幫助下,將目的基因DNA通過微管注射到受體細(xì)胞中.
電穿孔法
在短時間的高壓直流電脈沖的沖擊下,可以使原生質(zhì)膜的分子疏松,形成暫時性的直徑為3～4nl-n的小孔,但對原生質(zhì)體生活力影響不大.這時,存在于原生質(zhì)體周圍溶液中的外源DNA,就可以通過這種小孔進(jìn)入原生質(zhì)體,實(shí)現(xiàn)基因的直接轉(zhuǎn)移.
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