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Elisa試劑盒對(duì)血清鈣檢測(cè)

閱讀:434發(fā)布時(shí)間:2014-12-23

長(zhǎng)期以來(lái),關(guān)于很多項(xiàng)目間交叉污染已屢見報(bào)道,如ALT對(duì)LDH正干擾、CK對(duì)GLU正干擾等,甚至也有Ca對(duì)ALT交叉污染的報(bào)道,然而對(duì)于Ca受 到的干擾卻鮮見報(bào)端。
對(duì)18個(gè)項(xiàng)目進(jìn)行Ca交叉污染初篩試驗(yàn),結(jié)果顯示有7個(gè)項(xiàng)目在常規(guī)檢測(cè)條件下對(duì)Ca的干擾率超過3%,對(duì)以上7個(gè)項(xiàng)目進(jìn)行試劑交叉污染確證 試驗(yàn),結(jié)果與初篩試驗(yàn)基本吻合。常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目確實(shí)可能對(duì)Ca產(chǎn)生負(fù)干擾性質(zhì)的交叉污染。
之所以只選擇各試劑的R1,是因?yàn)镃a為單試劑,將混合血清分出(N+1)份,每份100ul,*份加5Oul生理鹽水,其余n份分別加相應(yīng)項(xiàng)目試劑(R1)50ul,測(cè)定ca,重復(fù)5次計(jì)算均值,*份結(jié)果為對(duì)照值A(chǔ)2

其中Ca采用偶氮胂Ⅲ法,TBIL和DBIL采用釩酸鹽法GLU采用氧化酶法,BUN采用*脫氫酶法,HDL.C和LDL.C采用直接法,其他都是IFCC推薦的常規(guī)方法。
 運(yùn)行系統(tǒng)清洗后,單獨(dú)測(cè)定混合血清鈣(ca)計(jì)算均值為對(duì)照值A(chǔ)1。儀器為日本谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總*(TBIL)、直接*(DBIL);肌酐(cR)為上海將來(lái)公司、尿酸(uA)、尿素氮(BUN)、葡萄糖(GLU)、肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)、α羥丁酸脫氫酶(HBD);二氧化碳(co2)、總*(Tc)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白*(HDL-c)、低密度脂蛋白*(LDL-c)。初篩交叉污染試驗(yàn)。將生化儀上18項(xiàng)其他項(xiàng)目

分別與Ca配對(duì)組合測(cè)定,樣本為混合血清,重復(fù)5次計(jì)算均值,篩選出與對(duì)照值偏差(干擾率)≥3%的項(xiàng)目(數(shù)目為N)。由于ca的通道號(hào)在儀器上處于zui末位,反應(yīng)時(shí)間也是各項(xiàng)目的zui大值10min,根據(jù)儀器檢測(cè)順序邏輯,Ca在任何組合中都是zui后開始檢測(cè)。這樣可以直接觀察各項(xiàng)目試劑對(duì)Ca的交叉污染影響程度。 將上一步篩選出N個(gè)項(xiàng)目做交叉污染確證試驗(yàn)。
初篩試驗(yàn)以TBIL(釩酸鹽法)、DBIL(釩酸鹽法)干擾zui大,而確證試驗(yàn)則顯示ALT(IFCC速率法)、AST(IFCC速率法)影響zui大。

隨著*向高速度和樣本、試劑微量化發(fā)展,交叉污染尤其是試劑間的交叉污染越來(lái)越突出。
在等同的測(cè)定條件下,在本實(shí)驗(yàn)眾多常規(guī)項(xiàng)目中為了消除微量重金屬導(dǎo)致的酶催化反應(yīng)中的抑制作用,EDTA被廣泛應(yīng)用于酶類試劑或有酶促反應(yīng)的試劑配制,本實(shí)驗(yàn)中試劑中可能含有較高濃度的EDTA,故對(duì)Ca造成了明顯的負(fù)干擾,Ca受到負(fù)干擾現(xiàn)象zui先被發(fā)現(xiàn),可見其抗*力較低,或存在Ca特異性污染源。
實(shí)驗(yàn)證明,試劑可對(duì)Ca測(cè)定產(chǎn)生嚴(yán)重負(fù)干擾,是可能施污染項(xiàng)目。經(jīng)調(diào)查研究,可能是這些試劑中的螫合劑成份絡(luò)合樣品中的Ca所致。防范措施包括:加強(qiáng)儀器試劑針和攪拌棒清洗、增加試劑針清洗程序、變換項(xiàng)目檢測(cè)通道順序等。
為營(yíng)造穩(wěn)定的反應(yīng)環(huán)境,生化試劑常添加檸檬酸鹽等的螯合劑。有報(bào)道證實(shí)鎂(Mg)試劑中EGTA成份對(duì)Ca造成了負(fù)干擾。而在TBIL 和DBIL試劑中,同時(shí)含有EDTA和檸檬酸鹽,所以一旦污染,對(duì)Ca造成的負(fù)干擾尤其明顯。
由此可見,其抗*力本身就存在天然缺陷,再 置身于眾多潛在的污染源中間,遭受干擾的風(fēng)險(xiǎn)可想而知,必須引起實(shí)驗(yàn)室的重視,并采取對(duì)策加以防范。


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