單純皰疹病毒Ⅱ型抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

【目的】利用酶聯(lián)免疫間接法原理（ELISA）定性檢測(cè)人血清中的單純皰疹病毒Ⅱ型IgG抗體，適用于單純皰疹病毒Ⅱ型感染的輔助診斷。

【原理】本試劑盒采用酶聯(lián)免疫間接法原理定性檢測(cè)人血清中的單純皰疹病毒Ⅱ型IgG抗體（HSV-Ⅱ-IgG），以純化單純皰疹病毒Ⅱ型抗原包被酶聯(lián)板。待檢血清中的單純皰疹病毒Ⅱ型抗體與包被抗原反應(yīng)，再與酶標(biāo)記鼠抗人IgG抗體結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。加底物TMB顯色，在酶標(biāo)儀上比色后根據(jù)吸光度（A值）判定有無(wú)單純皰疹病毒Ⅱ型IgG抗體的存在。

【組成】

【標(biāo)本采集、保存和運(yùn)輸】

1. 適用標(biāo)本類型：血清或血漿。血清中的內(nèi)源性干擾物如血脂、膽紅素、血紅蛋白在通常情況下不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。RF因子陽(yáng)性、孕婦、AFP陽(yáng)性標(biāo)本不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，HAV、HCV、乙肝等相關(guān)疾病抗體陽(yáng)性標(biāo)本通常情況下不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2. 標(biāo)本采集：

2.1 血清：用一次性無(wú)菌注射器抽取受檢者靜脈血2ml，注入一5ml無(wú)菌的干燥玻璃管中(或含有促凝劑)，室溫放置30min，2,000rpm離心3min，吸取上層血清，轉(zhuǎn)移至一潔凈的1.5ml離心管中，密閉送檢。血清樣本中混濁或有沉淀的樣本應(yīng)先離心或過濾后取澄清的液體進(jìn)行檢測(cè)，如果未充分沉淀，懸浮的纖維蛋白可能引起假陽(yáng)性。

2.2 血漿：用一次性無(wú)菌注射器抽取受檢者靜脈血2ml，注入一5ml無(wú)菌的含有Na2EDTA或枸櫞酸鈉抗凝劑的玻璃管中立即輕輕顛倒玻璃管混勻5-10次以充分混勻，室溫放置30min，2,000rpm離心3min，吸取上層血漿，轉(zhuǎn)移至一潔凈的1.5ml離心管中，密閉送檢。標(biāo)本中含有EDTA、檸檬酸鈉、肝素鈉等抗凝劑時(shí)，不影響結(jié)果。

3.保存和運(yùn)輸：標(biāo)本儲(chǔ)存在2~8℃，一周內(nèi)不需要檢測(cè)的標(biāo)本應(yīng)儲(chǔ)存在-20℃以下低溫冷凍保存，需長(zhǎng)期保存的標(biāo)本存于-70℃冰箱，避免反復(fù)凍融。血清的運(yùn)送應(yīng)在2~8℃條件下由專人運(yùn)送，由專人打開樣本的包裝，記錄相關(guān)信息，核對(duì)送檢樣本編號(hào)是否與送檢單一致，填寫樣本接受單。冷凍樣本實(shí)驗(yàn)前需要恢復(fù)到室溫（平衡30分鐘）并混勻。

【適用儀器】1.蒸餾水或去離子水                            2.一次性手套和定時(shí)器

            3.吸水紙                                      4.25ml、100ml、1000ml刻度量筒

            5.酶免自動(dòng)儀器或者手持單道/多道移液器         6.適用于盛放污物的容器

            7.溫箱或水浴箱                                8.用于混合微孔內(nèi)液體的振蕩器

            9.全自動(dòng)、半自動(dòng)、手工洗板系統(tǒng)                10.酶標(biāo)儀：?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng)450nm或者是雙波長(zhǎng)450nm/630nm

【貯藏、規(guī)格及有效期】

• 試劑盒置2~8℃避光保存，防止冷凍；請(qǐng)將拆封未用完的包被板放入自封袋封緊保存于2~8℃。
• 有效期：自檢定合格之日起在2~8℃條件下有效期12個(gè)月；打開包裝后被板在2~8℃條件下有效期30天。

3.  規(guī)格：SA-AQ109 48T/盒；SA-AQ110 96T/盒

【使用方法】

1． 取出試劑盒置室溫平衡30分鐘。將20×洗滌液用蒸餾水做20倍稀釋。

2． 加樣品：將待檢血清做1：10稀釋（取100μl標(biāo)本稀釋液加入反應(yīng)板孔內(nèi)，再加10μl待檢血清）混勻，同時(shí)預(yù)留陰、陽(yáng)性及空白對(duì)照共5孔。

3． 加入陰性對(duì)照3孔，陽(yáng)性對(duì)照1孔，各100μl對(duì)照血清。空白對(duì)照1孔空置。將反應(yīng)板輕輕震蕩使樣品混勻。

4． 溫育：用封板膜封板后，置37℃溫箱或水浴中反應(yīng)30分鐘。

5． 洗板：溫育后，將封板膜揭掉，吸干孔內(nèi)液體，用洗滌液洗板5次，每次浸泡30-60秒鐘。

6． 加酶標(biāo)工作液：每孔加入100μl酶標(biāo)工作液，空白孔除外。

7． 溫育：用封板膜封板后，置37℃溫箱或水浴中反應(yīng)30分鐘。

8． 洗板：溫育后，將封板膜揭掉，吸干孔內(nèi)液體，用洗滌液洗板5次，每次浸泡30-60秒鐘。

9． 顯色：每孔加底物A、B液各50μl，輕輕震蕩混勻，用封板膜封板后，置37℃溫箱或水浴中反應(yīng)10分鐘。

10. 終止：每孔加入終止液50μl，輕輕震蕩混勻。

11. 測(cè)定：設(shè)定酶標(biāo)儀波長(zhǎng)于450nm（建議雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè)），測(cè)定各孔A450值。注意：在終止反應(yīng)30分鐘內(nèi)讀數(shù)。

12. 當(dāng)使用單波長(zhǎng)時(shí)，校準(zhǔn)空白孔，設(shè)定酶標(biāo)儀波長(zhǎng)于450nm，測(cè)定各孔A450值，當(dāng)使用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè)時(shí)，可以不設(shè)空白孔，測(cè)定各孔A值。

【質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)】

 1.空白孔（只加顯色劑和終止液）的吸光度值應(yīng)不大于0.08.

 2.陽(yáng)性對(duì)照（PC）A450值大于0.30.

 3.陰性對(duì)照平均A450值小于0.08，如果質(zhì)控是有效的，實(shí)驗(yàn)結(jié)果就是有效的。  

【結(jié)果判定】

• 每個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果獨(dú)立使用，通過（Cut off）值判定結(jié)果。
• 計(jì)算臨界值：Cut off (C.O) =0.10+陰性對(duì)照平均（NC）A450值（當(dāng)陰性平均A450值小于0.05時(shí)，按0.05計(jì)算；當(dāng)陰性平均A450值大于或等于0.05時(shí)按實(shí)際值計(jì)算）。
• 陰性結(jié)果：標(biāo)本吸光度值﹤臨界值為陰性。陽(yáng)性結(jié)果：標(biāo)本吸光度值≧臨界值為陽(yáng)性。

【注意事項(xiàng)】

• 嚴(yán)格按說(shuō)明書操作，反應(yīng)溫度和時(shí)間必須嚴(yán)格控制。測(cè)定結(jié)果的判斷必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
• 任何血清都應(yīng)作為具有傳染性樣品對(duì)待。實(shí)驗(yàn)用的血清及廢棄物均應(yīng)經(jīng)滅菌后再處理（121℃20分鐘）。
• 試劑盒置2~8℃保存，有效期12個(gè)月，請(qǐng)于有效期內(nèi)使用。不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿混用。
• 本品僅用于體外診斷用。打開包裝后請(qǐng)?jiān)?0天內(nèi)使用。請(qǐng)將拆封后未用完的包被板放入自封袋內(nèi)封緊保存。