免疫PCR技術(shù)（Immuno-PCR）
免疫PCR方法（Immuno-PCR）是Takeshi等1992年將免疫學(xué)反應(yīng)和PCR技術(shù)相結(jié)合而創(chuàng)建的一種新的檢測(cè)技術(shù)，具有抗原、抗體反應(yīng)的特異性和PCR技術(shù)的性。它運(yùn)用PCR的高度敏感性來(lái)放大抗原抗體反應(yīng)的特異性，使實(shí)驗(yàn)中只需數(shù)百個(gè)抗原分子即可檢測(cè)，甚至在理論上可檢測(cè)到1至數(shù)個(gè)抗原分子。這種靈敏度使免疫檢測(cè)技術(shù)達(dá)到了一個(gè)新的高度。
免疫PCR主要由兩個(gè)部分組成：*部分是類(lèi)似于普通酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）的抗原抗體反應(yīng)；第二部分即常規(guī)的PCR擴(kuò)增和電泳檢測(cè)。其基本過(guò)程如下:首先將待檢測(cè)的抗原吸附于固相，經(jīng)封閉和沖洗后加入特異的抗體，此抗體常采用生物素標(biāo)記。經(jīng)孵育和沖洗后加入作為連接分子的親和素或葉綠素，再孵育和沖洗加生物素標(biāo)記的DNA，孵育和沖洗去除游離的DNA分子，然后加PCR擴(kuò)增系統(tǒng)放大結(jié)合于固相的DNA，用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)放大的PCR產(chǎn)物。
近幾年來(lái)，科技界陸續(xù)提出了免疫基因組學(xué)、腫瘤免疫組學(xué)、免疫組學(xué)、抗原組學(xué)、抗原表位組學(xué)等新概念。這些概念的提出，表示繼基因組、蛋白質(zhì)組之后在科學(xué)上又一個(gè)新領(lǐng)域的產(chǎn)生；對(duì)生物技術(shù)來(lái)說(shuō)，基因組研究的應(yīng)用，通過(guò)抗原表位組學(xué)、抗體組學(xué)和抗原表位組學(xué)與抗體組學(xué)是建立在基因組學(xué)和蛋白組學(xué)基礎(chǔ)上的新興領(lǐng)域，正在成長(zhǎng)為繼基因組和蛋白組后的科學(xué)熱點(diǎn)。應(yīng)用相關(guān)的學(xué)科的成就，結(jié)合相關(guān)的技術(shù)，經(jīng)過(guò)建立抗原表位庫(kù)和抗體庫(kù)，高通量篩選抗原靶標(biāo)和抗原表位，可大大加速診斷、治療藥物靶標(biāo)的篩選和研究與開(kāi)發(fā)的進(jìn)程。
1995年，美國(guó)科學(xué)家Mulis眾望所歸地獲得了諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)，他所取得的成就是發(fā)明了PCR技術(shù)。
PCR，中文譯為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，其實(shí)是一種DNA的快速擴(kuò)增技術(shù)，其擴(kuò)增效率之高就象核裂變的“鏈?zhǔn)椒磻?yīng)”那樣。PCR技術(shù)通過(guò)兩個(gè)短的稱(chēng)為引物的DNA小片段和一種耐熱的酶的作用，可以在3個(gè)小時(shí)內(nèi)把特定的DNA量提高1000萬(wàn)倍。這種技術(shù)一問(wèn)世，立刻引起了分子生物學(xué)研究的一場(chǎng)革命，人們利用這種轟動(dòng)*的技術(shù)很快就把微觀領(lǐng)域的生物學(xué)研究大大地往前推了一步?？梢赃@么說(shuō)，PCR技術(shù)使分子生物學(xué)研究一下子獲得了突破，而且隨著PCR技術(shù)的日趨完善，PCR在人類(lèi)社會(huì)生活中的應(yīng)用也越來(lái)越廣泛。比如說(shuō)在“DNA指紋”中我們提到，科學(xué)家們只需要一根頭發(fā)甚至一個(gè)細(xì)胞就可以完成DNA指紋的鑒定工作，這里實(shí)際上就要采用PCR技術(shù)，因?yàn)橐粋€(gè)細(xì)胞中的DNA含量實(shí)在太少了，人們根本不可能檢測(cè)到它的指紋；有了PCR技術(shù)就好辦了，通過(guò)PCR技術(shù)把這個(gè)細(xì)胞中的DNA斷擴(kuò)增1000萬(wàn)倍，這樣DNA量就足夠作指紋鑒定了。再比如，在醫(yī)院里檢驗(yàn)血液中的某種病毒，有時(shí)病毒量極少（例如有的艾滋病病毒攜帶者），通過(guò)傳統(tǒng)的檢查方法費(fèi)力又費(fèi)時(shí)，這時(shí)PCR技術(shù)也許就可以幫上忙?？梢韵冗x定這種病毒DNA上的一段DNA，設(shè)計(jì)合適的引物DNA，然后通過(guò)PCR技術(shù)一擴(kuò)增很快就可以判斷出血樣中是否擴(kuò)增出了大量的DNA，如果是的話(huà)，那么就說(shuō)明血樣中帶有該種病毒了。PCR方法不但有*的靈敏度，而且可以同時(shí)一次做近百個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)，省時(shí)省力效率高。
PCR技術(shù)神奇就神奇在以下幾個(gè)特點(diǎn)上：一是被擴(kuò)增的DNA所需量極小，理論上講一個(gè)分子就可以用于擴(kuò)增了；二是擴(kuò)增效率高，目的基因的量成指數(shù)形式擴(kuò)增，幾個(gè)小時(shí)就擴(kuò)增1000萬(wàn)倍以上?，F(xiàn)在PCR技術(shù)已經(jīng)被廣泛地應(yīng)用于生命科學(xué)研究、食品衛(wèi)生、醫(yī)療、法醫(yī)及環(huán)境監(jiān)測(cè)等諸多方面，真不愧是“獲得諾貝爾獎(jiǎng)”的好技術(shù)！
90年代初提出了抗體庫(kù)技術(shù)?？贵w庫(kù)技術(shù)簡(jiǎn)單地說(shuō)就是用細(xì)菌克隆取代B細(xì)胞克隆來(lái)表達(dá)抗體庫(kù)（repertoire）。由于RT-PCR技術(shù)的發(fā)展，大腸桿菌直接表達(dá)有功能性抗體分子片斷的成功以及噬菌體顯示技術(shù)（phage display）的問(wèn)世，在90年代初出現(xiàn)噬菌體抗體庫(kù)（phage antibody library）技術(shù)，該技術(shù)使得人們從應(yīng)用DNA重組技術(shù)改造現(xiàn)有的單抗發(fā)展到用基因工程技術(shù)克隆新的單抗，從而使抗體工程進(jìn)入一個(gè)全新的時(shí)期。
噬菌體抗體庫(kù) 繼雜交瘤技術(shù)之后又一突破性進(jìn)展的用于制備新型抗體的是噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)。Winter等人在1994年創(chuàng)建了噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)，克服了人體不能隨意免疫的缺點(diǎn)，用人的外周血制備抗體文庫(kù)，從而獲得人源性基因工程抗體。而且將抗體基因的克隆和表達(dá)融為一體，同在一種載體上進(jìn)行，將抗體基因表達(dá)在載體的表面，用固相化抗原對(duì)表達(dá)產(chǎn)物的載體進(jìn)行淘篩（panning），在數(shù)日內(nèi)就可篩選出陽(yáng)性克隆，從而能構(gòu)建出大庫(kù)容文庫(kù)囊括天然全套抗體基因，人們*可以用基因工程方法研制任何一種具有高度特異性的抗體，使抗體工程的設(shè)想成為現(xiàn)實(shí)。采用噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)篩選抗體不必進(jìn)行動(dòng)物免疫，易于制備稀有抗原的抗體及篩選全人源性抗體、高親和力抗體。同時(shí)也將抗體工程的研究推向了新高潮。
1.方法簡(jiǎn)單易行，節(jié)省時(shí)間。可通過(guò)發(fā)酵生產(chǎn)、大量制備。
2.篩選容量增大，可在數(shù)周內(nèi)篩選100萬(wàn)-1億個(gè)克隆，可獲得高親和力的人源化抗體。
3.可直接從未經(jīng)免疫的人或小鼠的淋巴細(xì)胞中得到抗體基因或IgV區(qū)基因，因此可以獲得*人源化的抗體，克服了人雜交瘤細(xì)胞不穩(wěn)定的缺點(diǎn)，避開(kāi)了人工免疫和雜交瘤技術(shù)。
4.可模仿體內(nèi)免疫過(guò)程，模擬天然全套抗體庫(kù)，方便的“制造”和克隆針對(duì)任何抗原的抗體。
隨著基因工程抗體技術(shù)的發(fā)展，在我國(guó)有些實(shí)驗(yàn)室開(kāi)始了噬菌體抗體庫(kù)的構(gòu)建。用抗體庫(kù)技術(shù)可直接制備人源抗體，例如利用被病原微生物感染的病人外周血細(xì)胞制備噬菌體抗體庫(kù)，用特定抗原進(jìn)行篩選，獲得抗乙肝表面抗原、甲肝病毒的人源抗體。抗體庫(kù)技術(shù)也被用于抗體性能改良，例如用鏈替換方法，以親本抗體的一條鏈（輕鏈）與另一條鏈 （ 重鏈）的文庫(kù)組合，構(gòu)建抗體庫(kù)，篩選高親和力的克隆，再固定重鏈，用同樣方法選擇具有更高親和力的輕鏈。一些特異性好、有應(yīng)用前景的鼠抗體，利用抗原表位定向選擇（EGS）方法，以鼠單抗可變區(qū)為模板，經(jīng)噬菌體展示技術(shù)，通過(guò)抗原導(dǎo)向，篩選能夠模擬鼠單抗可變區(qū)、結(jié)合相同抗原決定簇的人抗體，經(jīng)這一方法獲得人源抗體。國(guó)內(nèi)也有實(shí)驗(yàn)室在計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)下，將鼠抗體表面氨基酸殘基“人源化”，主要將鼠 Fv段表面暴露的骨架區(qū)殘基中與人Fv不同者改為人源性，使Fv的表面人源化，但仍保留其與抗原結(jié)合的特性。目前的問(wèn)題是，有很多試劑型抗體或診斷用抗體進(jìn)入市場(chǎng)，而治療用抗體只有少數(shù)進(jìn)入臨床試驗(yàn)。分析主要原因，一是工程抗體表達(dá)量低。國(guó)內(nèi)很多實(shí)驗(yàn)室，真核細(xì)胞中抗體表達(dá)量在1 毫克／升以下，很難用于生產(chǎn)。僅個(gè)別實(shí)驗(yàn)室在對(duì)載體進(jìn)行改造后，抗體表達(dá)量達(dá)到40毫克／升。二是動(dòng)物細(xì)胞規(guī)?；囵B(yǎng)技術(shù)還不成熟，與國(guó)外相比存在很大差距。由于技術(shù)和經(jīng)費(fèi)等原因，我們動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的規(guī)模zui大為50升，培養(yǎng)方式大多是采用微載體，懸浮批次和懸浮灌流尚屬空白。在噬菌體抗體庫(kù)的基礎(chǔ)上，在近幾年又發(fā)展了核糖體展示抗體庫(kù)技術(shù)。核糖體展示抗體庫(kù)技術(shù)代表了抗體工程的將來(lái)發(fā)展趨勢(shì)。
通派細(xì)胞庫(kù) 細(xì)胞查詢(xún)：
人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5
人胚肺成纖維細(xì)胞CCC-HPF-1
人胚胎氣管組織來(lái)源細(xì)胞CCC-HBE-2
人胚胎肺成纖維細(xì)胞WI-38
SV-40Z轉(zhuǎn)化肺成纖維細(xì)胞WI38/VA13
人胚肺二倍體細(xì)胞2BS
人胚肺二倍體細(xì)胞KMB-17
人肺細(xì)胞HLF-a
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞DMS 153
人胚肺細(xì)胞 VA13細(xì)胞WI-38 VA13亞系 2RA
人胚肺二倍體細(xì)胞HEL-1
人胚肺細(xì)胞系KuMA
人肺轉(zhuǎn)化細(xì)胞系A(chǔ)E1201
人肺鱗癌細(xì)胞NCI-H226
人胚肺二倍體細(xì)胞HEL-2
人支氣管上皮樣細(xì)胞BEAS-2B
人胚肺轉(zhuǎn)化細(xì)胞SL-1
人肺腺癌細(xì)胞Calu-3
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H209
人低分化肺腺癌細(xì)胞GLC-82
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H446
人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞NCI-H157
人肺鱗癌細(xì)胞NCI-H520
人肺巨細(xì)胞癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株P(guān)G-BE1
人肺巨細(xì)胞癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株P(guān)G-LH7
人肺癌細(xì)胞A-427
人低分化肺腺癌細(xì)胞SK-LU-1
人肺支氣管癌細(xì)胞NCI-H1650
人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞NCI-H1975
人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞NCI-H2087
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H2227
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H23
人肺腺鱗癌細(xì)胞NCI-H596
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H838
人肺鱗癌細(xì)胞LTEP-s
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞LTEP-sm
人肺鱗癌瘤株LTEP-s
人肺鱗癌細(xì)胞NCI-H1703
人肺鱗癌細(xì)胞NCI-H2170
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H524
人肺腺癌細(xì)胞SPC-A1
人肺癌細(xì)胞A549
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞H125
人肺癌細(xì)胞H1299
人肺癌細(xì)胞TKB-1
人肺腺癌細(xì)胞LTEP-a-2
人肺腺癌細(xì)胞Lu-165
人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H460
人肺腺癌細(xì)胞SPC-A-1
人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞095-D
人肺鱗癌細(xì)胞SK-MES-1
人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H661
人肺黏液上皮樣癌細(xì)胞NCI-H292
人肺退行性癌細(xì)胞Calu-6
人肺腺癌細(xì)胞NCI-H1395
