人Burkitt淋巴瘤細(xì)胞 Raji細(xì)胞培養(yǎng)在臨床診斷中應(yīng)用
(一)細(xì)胞培養(yǎng)在臨床病原學(xué)診斷中應(yīng)用
臨床上多種病原生物如病毒、立克次體、衣原體、胞內(nèi)寄生的細(xì)菌、原蟲(chóng)等的分離培養(yǎng)和藥物敏感試驗(yàn)是通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)完成的,如人免疫缺陷病毒(HIV)和新近出現(xiàn)的嚴(yán)重急性呼吸綜合征(SARS)病毒等就是通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)的。臨床應(yīng)用微量全血培養(yǎng)技術(shù)診斷HIV的感染,已用于兒童HIV垂直感染的早期診斷及可疑感染者的確認(rèn)。
1. 病毒的分離的常用細(xì)胞
對(duì)病毒性疾病的病原學(xué)診斷,zui可靠的方法是從標(biāo)本中分離并鑒定出致病性病毒。由于病毒具有嚴(yán)格的細(xì)胞內(nèi)寄生性,對(duì)病毒的分離培養(yǎng)必須選用敏感的細(xì)胞,包括動(dòng)物、雞胚和細(xì)胞培養(yǎng)。目前zui被廣泛采用的方法就是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。用于病毒分離的細(xì)胞種類(lèi)很多,由于不同種類(lèi)病毒對(duì)細(xì)胞的敏感性不同,因此首先應(yīng)根據(jù)病毒的種類(lèi)選擇敏感細(xì)胞進(jìn)行分離培養(yǎng)。細(xì)胞的種類(lèi)按其來(lái)源、染色體特征及傳代次數(shù)等可分為原代細(xì)胞、二倍體細(xì)胞及傳代細(xì)胞3種類(lèi)型。但由于原代細(xì)胞只能傳1~3代,器官來(lái)源、操作繁鎖等問(wèn)題使該方法應(yīng)用受限,而二倍體細(xì)胞和傳代細(xì)胞,由于可以長(zhǎng)期傳代、培養(yǎng)方便,故較為常用。
人Burkitt淋巴瘤細(xì)胞 Raji細(xì)胞培養(yǎng)在臨床診斷中應(yīng)用2. 體外抗病 效試驗(yàn)
抗病 效測(cè)定試驗(yàn)分為體內(nèi)試驗(yàn)和體外試驗(yàn)。體外試驗(yàn)是采用組織細(xì)胞培養(yǎng)法來(lái)觀察藥物的抗病毒作用。在實(shí)驗(yàn)中要根據(jù)藥物的特性來(lái)選擇病毒;根據(jù)病毒對(duì)細(xì)胞易感性選擇所用細(xì)胞;觀察藥效指標(biāo)常采用病毒致細(xì)胞病變(CPE)情況來(lái)判定藥物的抗病毒效果。下面以抗呼吸道病 物為例采用微量細(xì)胞培養(yǎng)法介紹藥物體外抑病毒試驗(yàn)方法。
?。ǘ?細(xì)胞培養(yǎng)在臨床腫瘤診斷中的應(yīng)用
1.腫瘤細(xì)胞端粒與端粒酶活性檢測(cè)
真核細(xì)胞染色體末端含有串連重復(fù)的DNA序列,稱(chēng)為特殊的DNA一蛋白質(zhì)端粒結(jié)構(gòu)。當(dāng)正常體細(xì)胞分裂時(shí),端粒的末端均會(huì)隨每次的復(fù)制被逐漸縮短,端粒的定長(zhǎng)可能與正常細(xì)胞的有限分裂代數(shù)(約50代左右)有關(guān),待端粒結(jié)構(gòu)縮短至zui后時(shí),細(xì)胞即不再能分裂,這從整體上也限制了機(jī)體壽命的長(zhǎng)短。原核細(xì)胞、真核細(xì)胞中的某些種系,很多腫瘤細(xì)胞等獲得了不死性,說(shuō)明它們具有延長(zhǎng)端粒的性能,能將新生的重復(fù)序列加到染色體的末端,這就是端粒酶(omerase)的作用。人的正常體細(xì)胞無(wú)端粒酶活性,這些酶的重新活化可能使細(xì)胞獲得了無(wú)限分裂的能力,故端粒酶的活性檢測(cè),可被作為惡性腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移的潛在標(biāo)記。
2.腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞凋亡
細(xì)胞凋亡是細(xì)胞在一定的生理或病理?xiàng)l件下,遵循自身的程序去結(jié)束生命的過(guò)程。這是保證多細(xì)胞生物個(gè)體正常發(fā)育、成熟和維持生理過(guò)程所必需的?,F(xiàn)已知,細(xì)胞凋亡作為一種細(xì)胞內(nèi)源性基因調(diào)控下的生理性死亡方式,此過(guò)程如發(fā)生障礙,不僅能成為腫瘤發(fā)生的主要機(jī)制之一,而且也與腫瘤的治療和耐藥性的形成密切相關(guān)。目前認(rèn)為多種化學(xué)結(jié)構(gòu)不同、作用機(jī)制各異的抗腫瘤藥物,均可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞逆轉(zhuǎn)出現(xiàn)凋亡。因此,掌握細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法,不僅可篩選抗腫瘤藥物,而且可用以研究腫瘤的發(fā)生及消亡機(jī)制。
3.腫瘤細(xì)胞體外藥物敏感性檢測(cè)
化學(xué)療法是治療惡性腫瘤的主要手段之一,但臨床醫(yī)師普遍存在著盲目用抗癌藥的情況。為提供合理用藥的科學(xué)依據(jù),利用來(lái)源于手術(shù)切除或活檢組織中分離的腫瘤細(xì)胞,進(jìn)行抗癌藥物敏感性測(cè)定,可為臨床醫(yī)生合理選擇有效藥物提供參考,現(xiàn)介紹幾種常用的方法。
?。ㄈ┘?xì)胞培養(yǎng)在臨床病因診斷中的應(yīng)用
由于對(duì)造血干細(xì)胞的研究取得成功,故臨床上利用造血細(xì)胞培養(yǎng)作為造血干細(xì)胞克隆性疾病的診斷和療效分析的常用方法。造血干細(xì)胞約占細(xì)胞總數(shù)的0.4%,可向多種定向祖細(xì)胞分化增殖,所以不同類(lèi)型的造血干細(xì)胞克隆性疾病,如骨髓增生異常綜合征(MDS)、急、慢性白血?。ˋML、CML)、再生障礙性貧血(AA)、骨髓增生性疾病等,其造血細(xì)胞的集落分析均有一定特點(diǎn),如重癥再生障礙性貧血患者的骨髓、外周血培養(yǎng)幾乎都無(wú)集落形成,可能與混合集落形成細(xì)胞(cfu-MIX)培養(yǎng)階段發(fā)生障礙有關(guān)。另一項(xiàng)專(zhuān)門(mén)技術(shù)是用來(lái)診斷與染色體變化相關(guān)的疾病,如判定和發(fā)現(xiàn)染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)目異常的綜合征。取自骨髓、外周血、絨毛膜、羊水中胎兒脫落細(xì)胞和臍血、皮膚等各種組織,使這些細(xì)胞在一定條件下培養(yǎng),使之大部分細(xì)胞處于有絲分裂并停止在分裂中期相,進(jìn)一步使細(xì)胞核體積脹大,以利于進(jìn)行染色體分析。染色體分析是產(chǎn)前診斷的主要內(nèi)容之一,此外臨床上更多的是用于細(xì)胞遺傳學(xué)診斷并成為臨床診斷白血病、判斷預(yù)后和觀察治療效果的重要方法學(xué)。(見(jiàn)產(chǎn)前診斷、遺傳病實(shí)驗(yàn)診斷等相關(guān)章節(jié))。
人Burkitt淋巴瘤細(xì)胞 Raji細(xì)胞培養(yǎng)在臨床診斷中應(yīng)用 (四)在臨床實(shí)驗(yàn)診斷中對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用的評(píng)價(jià)
1.培養(yǎng)技術(shù)繁雜,需具備一定的實(shí)驗(yàn)條件才能開(kāi)展。
2.細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)在某些方面的應(yīng)用是不可替代的。如分離培養(yǎng)病毒等細(xì)胞內(nèi)寄生的病原體。
3.細(xì)胞在體外培養(yǎng),由于環(huán)境及條件的局限性,應(yīng)避免將體外培養(yǎng)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)結(jié)果機(jī)械地看作體內(nèi)同種細(xì)胞性狀的必然反映。如體外篩選的抗病 物或抗腫瘤藥物,在體外有效不等于在體內(nèi)就一定有效。
4.細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的臨床應(yīng)用方興未艾,地、市級(jí)以上的醫(yī)院里應(yīng)積極創(chuàng)造條件建立細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室,開(kāi)展對(duì)病毒、腫瘤等實(shí)驗(yàn)診斷工作,以體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果輔助體內(nèi)的各項(xiàng)檢查。
5.細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與分子生物學(xué)技術(shù)、信息學(xué)和計(jì)算機(jī)技術(shù)等結(jié)合,在細(xì)胞水平與分子水平之間互動(dòng),在研究生命活動(dòng)規(guī)律和診斷疾病方面將發(fā)揮更大的作用。
供應(yīng)細(xì)胞查詢(xún):
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞3T3-Swiss albino細(xì)胞
人肺癌細(xì)胞A549 [A-549]細(xì)胞
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(二氫葉酸還原型缺陷型)CHO/dhFr-細(xì)胞
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克?。?span id="htifm6l" class="Apple-tab-span" style="white-space: pre; ">CHO-K1細(xì)胞
小鼠T淋巴瘤細(xì)胞Cyc-Tag(S49)細(xì)胞
人前列腺癌細(xì)胞DU 145 [DU145;DU-145]
小鼠骨髓細(xì)胞FDC-P1細(xì)胞
大鼠垂體瘤細(xì)胞GH3細(xì)胞
小鼠垂體瘤細(xì)胞GT1-1細(xì)胞
人胚腎細(xì)胞293 [HEK-293;HEK293]細(xì)胞
人宮頸癌細(xì)胞HeLa細(xì)胞
小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞MC3T3-E1細(xì)胞
人乳腺癌細(xì)胞MCF7 [MCF-7]細(xì)胞
人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231細(xì)胞
人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-435S細(xì)胞
人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-453細(xì)胞
小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞與大鼠膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞之融合細(xì)胞NG108-15 [108CC15]細(xì)胞
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞NIH/3T3細(xì)胞
人惡性多發(fā)性畸胎瘤細(xì)胞NTERA-2細(xì)胞
小鼠睪丸畸胎瘤細(xì)胞P19細(xì)胞
人卵巢畸胎瘤細(xì)胞PA-1細(xì)胞
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞PA12細(xì)胞
人胰腺癌細(xì)胞PANC-1細(xì)胞
大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞PC-12 [PC12]細(xì)胞
人成骨肉瘤細(xì)胞Saos-2細(xì)胞
人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y細(xì)胞
人卵巢腺癌細(xì)胞SK-OV-3 [SKOV3]細(xì)胞
人骨肉瘤細(xì)胞U-2 OS [U2OS;U2-OS;U-2OS]細(xì)胞
小鼠血細(xì)胞WEHI-3 [WEHI3]
小鼠成纖維細(xì)胞Φ2細(xì)胞
人橫紋肌肉瘤細(xì)胞A-204細(xì)胞
人肺腺癌細(xì)胞Calu-3細(xì)胞
非洲綠猴腎細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化)COS-7 [COS7]細(xì)胞
人腎癌Wilms細(xì)胞G401細(xì)胞
人肝癌細(xì)胞Hep G2 [HepG2]細(xì)胞
人包皮成纖維細(xì)胞HFF細(xì)胞
人早幼粒急性白血病細(xì)胞HL-60細(xì)胞
人骨肉瘤細(xì)胞HOS細(xì)胞
人慢性髓系白血病細(xì)胞K562細(xì)胞
人前列腺癌細(xì)胞LNCaP細(xì)胞
人乳腺癌細(xì)胞MCF 7B細(xì)胞
小鼠紅白血病細(xì)胞MEL細(xì)胞
人急性淋巴母細(xì)胞性白血病細(xì)胞MOLT-4細(xì)胞
人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5細(xì)胞
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H209細(xì)胞
人Burkitt淋巴瘤細(xì)胞Raji細(xì)胞