人胰腺導(dǎo)管癌細(xì)胞ES-2細(xì)胞 HE染色(脫蠟、水化、染色、脫水、封片)
脫蠟
在二甲苯脫蠟之前可以先在60℃烤箱內(nèi)0.5~1小時(shí),這樣可以使切片粘附更牢固不易脫片,也有利于脫蠟。
二甲苯I 10分鐘
二甲苯II 5分鐘
切片用二甲苯脫臘,應(yīng)視不同的季節(jié)有不同的脫蠟時(shí)間,在夏天,室溫較高,脫蠟較迅速,往往在2-3min就可脫蠟干凈,二在冬季,時(shí)間應(yīng)相對(duì)延長(zhǎng)。
切片在進(jìn)入二甲苯前,可用電吹風(fēng)吹切片,使切片上的蠟處于熔解狀態(tài),這樣脫蠟較迅速,尤其是冬天。
在二甲苯脫蠟之前可以先在60℃烤箱內(nèi)0.5~1小時(shí),這樣可以使切片粘附更牢固不易脫片,也有利于脫蠟。
水化
100%酒精I(xiàn) 5分鐘
100%酒精I(xiàn)I 5分鐘
95%酒精I(xiàn) 5分鐘
95%酒精I(xiàn)I 5分鐘
85%酒精 3分鐘
人胰腺導(dǎo)管癌細(xì)胞ES-2細(xì)胞 HE染色75%酒精 2分鐘
蒸餾水沖洗 1分鐘
筆者認(rèn)為,切片用酒精將二甲苯*消除后,在進(jìn)入蘇木素染液前,可用電吹風(fēng)吹干,這一步對(duì)于切片沒(méi)有充分的烤片時(shí)間,對(duì)于血塊等的切片來(lái)說(shuō),尤為重要,切片經(jīng)此步驟,增加了附貼的牢固性,減少切片在染色過(guò)程中脫離載片的機(jī)會(huì),保證了染色的成功率。另者,切片進(jìn)入蘇木素染液全無(wú)水,可保證了蘇木素染液的濃度和PH值,延長(zhǎng)其使用壽命。以往切片進(jìn)入蘇木素染液前,都須經(jīng)水洗,每次染色,都帶入不少的水分,稀釋了蘇木素染液的濃度,改變了它的PH值,使染液壽命縮短。
染色
蘇木精染液中浸5~20min
自來(lái)水沖洗3~5min
1%鹽酸酒精分化5~30s
自來(lái)水沖洗1~3min
0.5%伊紅酒精染色 1分鐘
人胰腺導(dǎo)管癌細(xì)胞ES-2細(xì)胞 HE染色蒸餾水洗 2分鐘
蘇木素染液有多種,常規(guī)應(yīng)用的通常為明礬蘇木素,明礬蘇木素又有Harris蘇木素,Mayer’s蘇木素,和Ehrish蘇木素等。
鹽酸酒精分化切片,濃度有0.25%,0.5%和1%根據(jù)各人的情況而使用。
伊紅酒精濃度有0.25%,0.5%和1%之分,根據(jù)各單位的情況而定。
分化伊紅須用濃度較高的酒精,以往伊紅染色以后,用低濃度的酒精分化,洗去多余的染液,實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)低濃度的酒精褪色能力特強(qiáng),如果掌握不好,染上的伊紅,便會(huì)被褪去大部分。改用較高濃度酒精后,這種現(xiàn)象便不會(huì)出現(xiàn)。
伊紅有水溶的和醇溶的,如果用的是水溶的,應(yīng)該在脫水前進(jìn)行染色,如果是醇溶的,應(yīng)使用與溶解伊紅等濃度的酒精開始脫水。
鹽酸酒精:在100ml的70%酒精內(nèi)加0.5~1ml的濃鹽酸。