細(xì)胞：KYSE-30細(xì)胞

中文名稱：人食管磷癌細(xì)胞 

生長特性：貼壁細(xì)胞

培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（ 請嚴(yán)格遵照無菌操作）

1． 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?1-2min）

2． 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)（不建議消化到細(xì)胞漂浮）去掉胰_酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。

3． 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4． 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液（每周 2-3 次），待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。

（網(wǎng)絡(luò)信息主針對網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請咨詢細(xì)胞庫管理員，以細(xì)胞庫管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫管理員，避免不必要的損失；）

分離出具生殖潛能干細(xì)胞

在母體中發(fā)育了50天的豬胎兒皮膚組織中分離出一些干細(xì)胞，這些干細(xì)胞具有某種分化成具有卵母細(xì)胞特性的細(xì)胞的內(nèi)在機(jī)制。

用誘導(dǎo)分化的條件培養(yǎng)基培養(yǎng)這些干細(xì)胞時(shí)，發(fā)現(xiàn)其中的一個(gè)亞群可以表達(dá)一些只有sheng殖細(xì)胞才能特異表達(dá)的基因和蛋白。

根據(jù)形態(tài)學(xué)觀察，發(fā)現(xiàn)所培養(yǎng)的細(xì)胞從誘導(dǎo)分化的第10天開始，形成了克隆樣結(jié)構(gòu)，其中的一些克隆樣結(jié)構(gòu)逐漸從培養(yǎng)皿上脫壁，呈“囊泡狀聚集體"懸浮于培養(yǎng)基中。在很多囊泡狀聚集體中央有一個(gè)較大的細(xì)胞，這與同sheng殖有關(guān)的卵母細(xì)胞復(fù)合體結(jié)構(gòu)非常相似。

如果將這些囊泡狀聚集體放入供卵母細(xì)胞生長的培養(yǎng)基中，經(jīng)過長時(shí)間的培養(yǎng)，囊泡狀聚集體中的細(xì)胞亞群可以將位于中央部分的大細(xì)胞擠出；進(jìn)一步培養(yǎng)這些“大細(xì)胞"，最終可以長成直徑為80-100?滋m的細(xì)胞。 

為了檢測這些大細(xì)胞是否表達(dá)了具有卵母細(xì)胞代表性的標(biāo)記分子，將這些大細(xì)胞挑出，分組提取RNA。

RT-PCR的檢測結(jié)果表明，在這些“大細(xì)胞"以及作為陽性對照的卵巢組織中，均可以檢測到所有卵母細(xì)胞特異表達(dá)的標(biāo)記分子物。