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中級(jí)會(huì)員 | 第13年

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ATCC細(xì)胞
SK-MEL-1細(xì)胞 SKLU1細(xì)胞 SKHEP1細(xì)胞 SKBR3細(xì)胞 SiHa細(xì)胞 SH-SY5Y細(xì)胞 SCaBER細(xì)胞 Saos-2細(xì)胞 RPMI 8226細(xì)胞 RL95-2細(xì)胞 RKO細(xì)胞 Reh細(xì)胞 RD細(xì)胞 Ramos細(xì)胞 Raji細(xì)胞 QSG-7701細(xì)胞 QGY-7703細(xì)胞 QGY-7701細(xì)胞 PLC/PRF/5細(xì)胞 PC-3細(xì)胞 PANC-1細(xì)胞 PA-1細(xì)胞 OVCAR-3細(xì)胞 OS-RC-2細(xì)胞 NTERA-2細(xì)胞 NCI-N87細(xì)胞 NCI-H838細(xì)胞 NCI-H661細(xì)胞 NCI-H596細(xì)胞 NCI-H520細(xì)胞 NCI-H460細(xì)胞 NCI-H446細(xì)胞 NCI-H358細(xì)胞 NCI-H295R細(xì)胞 NCI-H292細(xì)胞 NCI-H23細(xì)胞 NCI-H209細(xì)胞 NCI-H2087細(xì)胞 NCI-H1975細(xì)胞 NCI-H1650細(xì)胞 NCI-H1688細(xì)胞 NCI-H157細(xì)胞 NCI-H1395細(xì)胞 NCI-H1299細(xì)胞 KLE細(xì)胞 LNCaP細(xì)胞 LoVo細(xì)胞 LS180細(xì)胞 LS174T細(xì)胞 MCF 10A細(xì)胞 MCF7細(xì)胞 MEG-01細(xì)胞 MG-63細(xì)胞 MRC-5細(xì)胞 NAMALWA細(xì)胞
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胚胎成纖維細(xì)胞

體細(xì)胞胚誘導(dǎo)

時(shí)間:2013/7/4閱讀:1521
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 體細(xì)胞胚誘導(dǎo)

 
1. 實(shí)驗(yàn)材料: 胡蘿卜種子。
2. 培養(yǎng)基
2.1 胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基
MS無(wú)機(jī)鹽附加:煙酸0.05mgL-1、VB6和VB1各0.01mgL-1、甘氨酸3mgL-1、肌醇100mgL-1、激動(dòng)素0.2mgL-1、2,4—D 0.1mgL-1、蔗糖20gL-1、瓊脂2-5gL-1,pH5.8。
2.2 體細(xì)胞胚形成培養(yǎng)基
MS無(wú)機(jī)鹽附加:煙酸0.05mgL-1、VB6和VB1各0.01mgL-1、甘氨酸3mgL-1、肌醇100mgL-1、激動(dòng)素0.2mgL-1、蔗糖20gL-1,pH5.8。
3. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程
a. 煙草種子以10%次氯酸鈣溶液表面消毒15min,用無(wú)菌蒸餾水洗3次,置于培養(yǎng)皿內(nèi)無(wú)菌的濕潤(rùn)濾紙上,在25℃下于暗處萌發(fā);
b. 取7日齡幼苗切取下胚軸部位長(zhǎng)1cm,單個(gè)地置于胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,接種好的材料置于25℃溫度下黑暗培養(yǎng)4-6周;
c. 將愈傷組織小塊轉(zhuǎn)移到與原來(lái)成分相同的新鮮培養(yǎng)基上,一半置于于25℃下照光培養(yǎng),另一半繼續(xù)在黑暗條件下培養(yǎng),若以類似方式每4周繼代1次,可對(duì)組織進(jìn)行繁殖;
d. 誘導(dǎo)體細(xì)胞胚胎發(fā)生:將在光照下繼代培養(yǎng)的愈傷組織塊轉(zhuǎn)移到不含2,4—D的培養(yǎng)基中培養(yǎng),3~4周后,將出現(xiàn)大量的各處在不同的發(fā)育階段的體細(xì)胞胚。
e. 觀察體細(xì)胞胚的發(fā)育過(guò)程,統(tǒng)計(jì)每個(gè)愈傷組織形成的體細(xì)胞胚數(shù),統(tǒng)計(jì)不同發(fā)育時(shí)期的體細(xì)胞胚占胚總數(shù)的比例,分析培養(yǎng)中體細(xì)胞胚形成的時(shí)間、控制其一致性可能采取得調(diào)控措施。

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