細(xì)胞：VERO C1008（E6）細(xì)胞

中文名稱：非洲綠猴腎細(xì)胞

生長特性：貼壁細(xì)胞

培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（ 請嚴(yán)格遵照無菌操作）

1． 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意把握消化時間，通?？刂圃?1-2min）

2． 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ粢萠酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。

3． 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4． 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液（每周 2-3 次），待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項操作或凍存。

（網(wǎng)絡(luò)信息主針對網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請咨詢細(xì)胞庫管理員，以細(xì)胞庫管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫管理員，避免不必要的損失；）

揭開真核細(xì)胞分泌過程的秘密

在真核細(xì)胞中,分泌型的脂和蛋白質(zhì)從高爾基體反面的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)逐步移向質(zhì)膜,該過程受到了載體囊泡網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的嚴(yán)格控制。這種囊泡是如何形成的，現(xiàn)在還沒有清晰的答案。

蛋白激酶D和磷脂酰肌醇4-激酶IIIβ相互作用，并促進(jìn)該過程的發(fā)生。 

人體內(nèi)有三種蛋白激酶D同工型，PKD1-3。已經(jīng)知道的至少有兩個，PKD1和PKD2，在TGN膜形成載體囊泡中起重要作用；

具體過程仍然不知。磷酸化的膜成分PI(4)P也被認(rèn)為調(diào)節(jié)著這個過程。科研人員從而研究了在從TGN到質(zhì)膜的囊泡運輸中，PKD蛋白和PI4K之間的相互關(guān)聯(lián)情況。 

在哺乳細(xì)胞中有很多的PI4K酶，PI4KIII是一種與酵母的PI4K酶--Pik1同源的蛋白激酶。Pik1在酵母的“高爾基體-細(xì)胞表面"運輸通路中起作用。

在哺乳細(xì)胞中也研究了這個蛋白質(zhì)。發(fā)現(xiàn)三種PKD同工型和PI4KIIIβ共定位于高爾基體復(fù)合物中；體外的實驗表明，PKD同工型可以促使PI4KIII磷酸化。

PKD1和PKD2可以識別PI4KIIIβ的磷酸化位點Ser294，該位點在酵母Pik1具有保守性。通過使用抗磷酸化位點的抗體，科研人員證實了PKD介導(dǎo)的PI4KIIIβ磷酸化過程在體內(nèi)也同樣發(fā)生。