細(xì)胞:MGC-803細(xì)胞
中文名稱(chēng):人胃腺癌細(xì)胞
生長(zhǎng)特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:1640 培養(yǎng)基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
MGC-803細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通??刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ魕i酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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上皮細(xì)胞是最常發(fā)生癌變的細(xì)胞類(lèi)型。癌細(xì)胞的擴(kuò)散一般經(jīng)過(guò)一個(gè)EMT轉(zhuǎn)化(上皮細(xì)胞到間葉細(xì)胞轉(zhuǎn)化)。
上皮細(xì)胞位于皮膚或腔道的表層。(通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng):BIU-87細(xì)胞)將研究重點(diǎn)放在乳上皮細(xì)胞,這些細(xì)胞在乳中形成運(yùn)送母乳的管道。為了離開(kāi)乳以及轉(zhuǎn)移到身體的其它部位,腫瘤細(xì)胞必須打破它們與其它上皮細(xì)胞之間。
研究從正常小鼠中取出小塊的乳組織,(通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng):H295R細(xì)胞)在模擬其自然環(huán)境的凝膠中培養(yǎng)它們。通過(guò)用色蛋白標(biāo)記不同類(lèi)型的細(xì)胞,他們可以在顯微鏡觀察隨細(xì)胞遺傳學(xué)而發(fā)生的細(xì)胞行為變化。
他們研究的第一個(gè)蛋白是E-鈣粘蛋白(E-cadherin),(通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng):H157細(xì)胞)這個(gè)蛋白位于大多數(shù)上皮細(xì)胞表面,被用來(lái)連接上皮細(xì)胞。E-鈣粘蛋白就像一個(gè)貼紙,將上皮細(xì)胞彼此結(jié)合在一起,它的缺失通常與人類(lèi)乳癌相關(guān)。
實(shí)驗(yàn)中,研究將這個(gè)蛋白從正常小鼠乳細(xì)胞中刪除,(通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng):H1264細(xì)胞)觀察會(huì)發(fā)生什么結(jié)果。預(yù)期細(xì)胞會(huì)分離,獨(dú)自移動(dòng)到周?chē)哪z中。
但研究發(fā)現(xiàn),大多數(shù)上皮細(xì)胞仍然彼此連接在一起,(通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng):H1339細(xì)胞)盡管它們的結(jié)構(gòu)已經(jīng)被破壞。一些上皮細(xì)胞穿透凝膠,但是通常在單行對(duì)列中,這能保持與組織的連接。研究人員在活的小鼠中也發(fā)現(xiàn)了相似的結(jié)果。