細(xì)胞：Malme-3M細(xì)胞

中文名稱(chēng)：人皮膚惡性黑色素瘤細(xì)胞

生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞

培養(yǎng)基：MEM+10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

Malme-3M細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（ 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作）

1． 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意把握消化時(shí)間，通常控制在 1-2min）

2． 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)（不建議消化到細(xì)胞漂浮）去掉yi酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。

3． 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4． 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液（每周 2-3 次），待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。

（網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢(xún)細(xì)胞庫(kù)管理員，以細(xì)胞庫(kù)管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢(xún)細(xì)胞庫(kù)管理員，避免不必要的損失；）

SUMO化修飾與細(xì)胞的生物鐘

在細(xì)胞水平上，它們的生物鐘是被精確地控制著。調(diào)節(jié)性反饋環(huán)通過(guò)調(diào)控一些生物鐘蛋白使細(xì)胞保持著生理節(jié)律。(通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng)：HM-7細(xì)胞)

一個(gè)調(diào)控生物鐘的核心蛋白-BMAL1，似乎是通過(guò)SUMO修飾來(lái)實(shí)現(xiàn)其功能的。 （通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng)：SW620細(xì)胞）

BMAL1和CLOCK分子一同結(jié)合稱(chēng)為E-box的調(diào)節(jié)性DNA序列，來(lái)調(diào)控參與生物鐘機(jī)制的基因的表達(dá)，如PER1（周期同系物-1；period homologue-1）。（通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng)：SW527細(xì)胞）

BMAL1蛋白當(dāng)中有好些賴(lài)氨酸殘基非常保守，不僅在相同的蛋白家族中保守，而且還具有跨種的保守性。電腦模擬分析發(fā)現(xiàn)這些殘基與用于SUMO化的共有基序非常吻合。（通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng)：AGS細(xì)胞）

發(fā)現(xiàn)在COS1細(xì)胞中，BMAL1被成功地SUMO化，通過(guò)定點(diǎn)誘變發(fā)現(xiàn)K259是體內(nèi)SUMO化的主要位點(diǎn)。 （通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng)：OS-RC-2細(xì)胞）

在肝臟組織中加入SUMO蛋白酶的抑制劑，以穩(wěn)定SUMO化的蛋白質(zhì)。研究者檢測(cè)了SUMO化的BMAL1蛋白，發(fā)現(xiàn)該蛋白的量的變化具有周期性。磷酸化的BMAL1與SUMO化的BMAL1同時(shí)增加，而且與生物鐘基因（如PER1）的誘導(dǎo)保持一致。 （通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng)：ACHN細(xì)胞）